检验医学与临床２０１１年１月第８卷第２期Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１１，Ｖｏ１．８，ＮＯ．２ ・ １５１ ・ ・论 著・ 老年患者血清梅毒抗体酶联免疫吸附试验假阳性结果分析 邓红艳，赫兰辉（成都大学附属医院检验科，成都６１００８１） 【摘要】 目的 对老年患者血清梅毒抗体假阳性结果及与临床的相关性进行分析和探讨。方法 采用梅毒螺 旋体～酶联免疫吸附试验（Ｔｐ－ＥＬＩＳＡ）分别检测２ ４５４例６Ｏ岁以上老年患者和１２ ５４５例６ｏ岁以下患者血清中梅毒 特异性抗体，阳性结果再用梅毒螺旋体明胶凝集试验（ＴＰＰＡ）复查。结果 ６Ｏ岁以上老年患者ＴＰ—ＥＬＩＳＡ假阳性 率明显高于６Ｏ岁以下患者，两组间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论 试剂本身、人类宿主相关的螺旋体、基础 疾病等因素是老年患者ＴＰ－ＥＬＩＳＡ易发生假阳性的重要原因，应防止产生误诊导致的医疗纠纷。 【关键词】梅毒； 抗体，细菌； 酶联免疫吸附测定；’假阳性反应； 老年人 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１１．０２．０１０ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－９４５５（２０１１）０２—０１５１－０ｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｂｙ ＥＬＩＳＡ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｅｌｄｅｒｌｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ＤＥＮＧ Ｈｏｎｇ—ｙａｎ，ＨＥ Ｌａｎ—ｈｕｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ，Ｓｉｃｈｕａｎ ６１００８１，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ ｉｎ ｅｌｄｅｒｌｙ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ａｎｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴＰ—ＥＬｌＳＡ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ａｎｔｉ—ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ ２４５４ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ａｇｅｄ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ６０ ｙｅａｒｓ ａｎｄ １２，５４５ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ａｇｅｄ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ６０ ｙｅａｒｓ ｉｎ ｏｕｒ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆｒｏｍ Ｊａｎｕａｒｙ ２００７ ｔｏ Ｊａｎｕａｒｙ ２０１０，ｔｈｏｓｅ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＴＰＰＡ．Ｒｅ－ ｓｕｉｔｓ Ｔｈｅ ｆａｌｓｅ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｏｆ ＥＬＩＳＡ－ＴＰ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｇｅｄ ｏｖｅｒ ６０ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐａ— ｔｉｅｎｔｓ ａｇｅｄ ｔｅｓｓ ｔｈａｎ ６０ ｗｉｔｈ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｒｅａｇｅｎｔ ｉｔ— ｓｅｌｆ。ｈｕｍａｎ ｈｏｓｔｓ～ｒｅｌａｔｅｄ ｓｐｉｒｏｃｈｅｔｅｓ，ｂａｓｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ ａ ｔｈｅ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｒｅａｓｏｎｓ ｅａｓｉｌｙ ｃａｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＴＰ—ＥＬＳＡ ｉｎ ｅｌｄｅｒｌｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ．Ｓｈｏｕｌｄ ｐｒｅｖｅｎｔ ｍｉｓｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｔｏ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｉｓｐｕｔｅｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｓｙｐｈｉｌｉｓ；ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｂａｃｔｅｒｉａｌ；ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ；ｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ； ａｇｅｄ 梅毒的病原体为梅毒螺旋体（ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ，ＴＰ），因 经ｔ检验比较，两组间差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），见表１。 其透明不易染色，又称苍白螺旋体口］。梅毒是ＴＰ感染引起的 表１ 两组梅毒抗体检测结果 较 一种慢性全身性性传播疾病，其临床表现复杂、多样。梅毒发 病率近年来在我国呈明显上升趋势，已成为十分重要的社会和 医学问题口］。作者在工作中也注意到有很多临床无症状，主诉 无发病史和疾病接触史的老年人ＴＰ－酶联免疫吸附试验（ＴＰ— ＥＬＩＳＡ）检出假阳性率高＿３］，错误的检测结果会导致很多医疗 纠纷。为此，本文对本院２００７年１月至２０１０年１月１４ ９９９例 ３讨 论 患者的梅毒血清抗体ＥＬ１ＳＡ检测结果进行了分析，同时就与 临床上梅毒的诊断主要是根据临床症状和血清学检查，而 临床的相关性进行探讨。 在血清学检查中，对特异性抗体检测最常用的检测方法是ＴＰ～ ＥＬＩＳＡ和ＴＰＰＡ（或梅毒螺旋体血细胞凝集试验ＴＰＨＡ）＿４］。 １对象与方法 １．１研究对象２００７年１月至２０１０年１月在本院住院作输 ＴＰＰＡ（或ＴＰＨＡ）已被美国疾病控制中心（ＣＤＣ）定为确诊方 血前检查的患者１４ ９９９例（不包括重名患者），年龄０～１００ 法，而ＴＰ～ＥＬＩＳＡ因其对ＩｇＧ和ＩｇＡ都具有很好的检测能 力Ｄ］，且灵敏度高、价格低廉、结果客观，已在国内外广泛使 岁，其中６Ｏ岁以上２ ４５４例，６Ｏ岁以下１２ ５４５例。 用Ｅ 。 １．２方法 导致老年患者血清梅毒抗体检测ＥＬＩＳＡ法假阳性的原因 １．２．１检测试剂ＴＰ抗体诊断试剂盒（双抗原夹心酶联免疫 可能是：（１）这些老年患者体内可能有口腔螺旋体、皮肤相关的 法）由上海科华生物工程股份有限公司提供。梅毒螺旋体明胶 螺旋体、肠道螺旋体共生诱导产生抗原群或科特异抗原的交叉 凝集试验（ＴＰＰＡ）试剂盒为珠海丽珠试剂有限公司提供的日 反应抗体。（２）目前ＥＬＩＳＡ试剂盒均未配置吸收稀释剂，待测 本富士公司赛乐迪亚ＳＥＲ０ＤＩＡ．ＴＰＰＡ。 血清均未用吸收剂吸除与非梅毒螺旋体交叉反应的抗体 。 １．２．２检测仪器ＭＫⅡ型酶标仪。 （３）这些老年患者的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂 １．２．３检测方法实验过程均严格按说明书进行，阳性标本 抗体或抗ＴＰ抗体的交叉抗原引起假阳性 ］。（４）自身免疫 用ＴＰＰＡ试剂（凝集法）确诊 病、疟疾、新近免疫接种、皮肤病、心血管病、结核、麻风、静脉注 １． 统计学方法应用ＳＰＳＳＩＯ．０进行ｔ检验。 射毒品、病毒感染、热性病也可导致ＴＰ—ＥＬＩＳＡ试验假阳性 。 ２结 果 综上所述，Ｔ ＥＬＩｓＡ阳性结果不能作为老年患者感染 ＴＰ—ＥＬＩＳＡ检测６Ｏ岁以上人群的梅毒特异性抗体假阳性 ＴＰ的绝对依据，《全国临床检验操作规程》（第３版）中明确指 率为０．３３ Ａ０，明显高手６ｏ岁以下人群的假阳性率（０ １４ ）， 出，梅毒血清学试验阳性仅提示所测标本中有（下转第１５３页） 检验医学与临床２０１１年１月第８卷第２期Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１１，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．２ ・１５３・ ０．９８８＜０．９９９（图１）。３个时段ｃＴｎＩ的最佳临界值、灵敏度和 不同的诊断界值。由于不同厂家所用抗体针对ｃＴｎＩ的位点不 特异度排序均为：４ ｈ＜６ ｈ＜１０ ｈ（表１）。 同，以及ｃＴｎＩ的存在形式与释放人血后稳定状态等因素会不 表１胸痛后４、６和１０ ｈ ｃＴｎＩ最佳临界值 可避免地给检测结果带来差异＿６］。而方法学的差异，致使同一 标本在不同仪器检测时的ＣＴｎＩ结果没有可比性［７］。生产厂 商提供的参考范围与临界值仅能作为参考，不可取代ＲＯＣ曲 线验证。ＲＯＣ曲线方法简便，选择最佳截断点作为诊断标准， 不仅兼顾灵敏度与特异度，还能使误诊率和漏诊率最小。 建立与自己实验室水平相关的ｃＴｎＩ参考范围和医学决定 水平有多方面的优势。其一，临床医生对ＡＭＩ的诊断标准不 ３讨 论 再模糊，提高了ｃＴｎＩ的利用效率；其二，从实验室角度来看距 本次实验病例组３个不同时段ｃＴｎＩ含量有差别，原因是 ｃＴｎＩ测定方法的标准化更近一步。 ＡＭＩ患者的ｃＴｎＩ含量升高有一个窗口期，发病４－－６ ｈ才升高 参考文献 到诊断临界点。４ ｈ ｃＴｎＩ含量低于６ ｈ含量，这是由于ｃＴｎＩ的 释放不是一蹴而就，而是需要一定时间。Ｔｕｏｍｏ等＿４ 在测量 ［１］Ａｎｔｈｏｎｙ ＪＭ，Ｐａｕｌ ＪＢ．Ｃｌｏｓｅ ｐｈｙｓｉｃａｌ ｌｉｎｋａｇｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ２９３例ＡＭＩ患者ｃＴｎＩ时发现，胸痛后６ ｈ内和６～２４ ｈ内 ｔｒｏｐｏｎｉｎ ｇｅｎｅｓ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，ｓｅｑｕｅｎｃｅ，ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＵＣ分别为０．９０８和０．９９５ Ｆｇ／Ｌ。本次实验４、６和１０ ｈ ｔｈｅ ｌｏｃｕｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｃａｒｄｉａｃ ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｉ ａｎｄ ｓｌｏｗ ｓｋｅｌｅｔａｌ ＡＵＣ分别为０．８３０、０．９８８和０．９９９ ｇ／Ｌ，提示随着时间推移， ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｔ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，１９９９，５７（１）：１０２—１０９． ｃＴｎＩ的诊断正确率有逐渐提高的趋势。如果４和１０ ｈ的决定 ［２］Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｏｎ ＲＨ，Ｄｕｈ ＳＨ，Ａｐｐｌｅ ＦＳ，ｅｔ ａ１．Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ 值均采用６ ｈ的决定值０．８１５ ｇ／Ｌ，那么４ ｈ的灵敏度降到 ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｉ ａｓｓａｙｓ：ｒｏｕｎｄ ｒｏｂｉｎ ｏｆｔｅｎ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ３８ ，特异度升至９３ ；而１０ ｈ灵敏度则升到１００ ，特异度 ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，２００１，４７（３）：４３１—４３７． 降到９３ 。如果不同时间段诊断ＡＭＩ采用同一临界值（人院 ［３］门卫东，马建智．心肌肌钙蛋白的研究进展及应用［Ｊ］．中 ４ ｈ为０．８１５ Ｆｇ／Ｌ），很明显各时间段ｃＴｎＩ的灵敏度和特异度 国现代医生，２００８，４６（１３）：４０—４１． 没有同时达到最大化，即没有同时让误诊率和漏诊率最小。因 ［４１ Ｔｕｏｍｏ Ｉ，Ｊｕｈａ Ｉ ，Ｐｅｋｋａ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｅａｒｌｙ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｍｙｏｃａｒ— 此临床诊断ＡＭＩ应考虑ｃＴｎＩ含量的动态变化ｉ同时应考虑患 ｄｉａｌ ｉｎｊｕｒｙ：ｃＴｎＩ ｉｓ ｅｎｏｕｇｈ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ，２００９，４００ 者￣ＴｎＩ含量处于“窗口期”，即超过健康人参考范围９９ ，但 （１ ２）：８２—８５． 低于诊断临界值时，不应采用同一临界值标准，需采用动态临 ［５］Ｃｈａｒｌｅｓ Ｄ，Ｊｅｒｏｍｅ Ｉ，Ｎｉｃｏｌａｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｅｒｏｖａｓｃｆｌｌａｒ ｏｂ— 界值标准。为提高诊断效率，窗口期不同时间点的ｃＴｎＩ结果 ｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ３－ｔｅｓｌａ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ 应分别选用４ ｈ或者６ ｈ的最佳临界值。 ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｌａｓｍａ 美国临床生物化学科学院建议选取两个决定水平，低值仅 ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｉ ｌｅｖｅｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ，２０１０，５５（１０）：６５— 代表心肌轻微损伤，高值诊断ＡＭＩ。Ｃｈａｒｌｅｓ等＿［］指出，ＡＭＩ ６９． 发病６ ｈ内的ｃＴｎＩ临界值为０．８９／，ｇ／Ｌ，ｃＴｎＩ大于０．８９／，ｇ／Ｌ ［６３冯仁丰．临床检验质量管理技术基础［Ｍ］．２版．上海：上 可以诊断心肌有微血管阻塞。对超过９７．５ 百分位数但低于 海科学技术文献出版社，２００８． 医学决定水平的数据，可以排除ＡＭＩ，但可提示有心肌损伤的 Ｅ７］陈华琼．儿童心肌损伤心肌标志物测定方法的发展［Ｊ］． 发生。明确诊断界限可以避免ｃＴｎＩ含量在临界值附近两侧的 重庆医科大学学报，２００７，３２（９）：９９８—１００１． 患者被误诊为ＡＭＩ或漏诊，有助于提高检验方法的灵敏度和 特异度，同时提高有限医疗资源的利用效率。 ． （收稿日期：２０１０ １０ １７） 目前用于测定ｃＴｎＩ的仪器和试剂有多种，各种方法都有 （上接第１５１页） 代医药杂志，２００４，６（５）：７． 抗类脂抗体或抗ＴＰ抗体存在，不能作为患者感染ＴＰ的绝对 王柳溪．ＴＰ ＥＩ ＩＳＡ法检测老年人梅毒抗体易产生假阳 依据，阴性结果也不能排除ＴＰ感染，检测结果应结合临床综 性原因分析［Ｊ］．医学理论与实践，２００８，２１（９）：１０８５— 合分析 ］。梅毒检查结果的正确与否一直是十分敏感的医学 １０８６． 与社会问题，尤其对于老年梅毒患者。因此，检验人员对老年 朱安友，王风超，葛鑫，等．３７３例普通住院患者梅毒免疫 患者血清梅毒抗体ＥＬＩＳＡ检测会出现假阳性应该有一个清醒 法筛查阳性结果分析［Ｊ］．检验医学与临床，２００８，５（２１）： 的认知，要及时与临床科室进行沟通，防止产生误诊，导致医疗 １３Ｏ３—１３０４． 纠纷。 武建国．老年人抗梅毒螺旋体抗体测定的假阳性率偏高 参考文献 ＿Ｊ］．临床检验杂志，２００６，２４（４）：２４１—２４３． Ｎｏｒｒｉｓ，ＳＴ，Ｐｏｐｅ Ｖ，Ｊｏｈｎｓｏｎ ＲＥ，ｅｔ ａ１．Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ａｎｄ ［１１吴志华．皮肤性病学［Ｍ］．３版．广州：广东科学技术出版 ｏｔｈｅｒ ｈｏｓｔ—ａｓ—ｓｏｃｉａｌｅｄ ｓｐｉｒｏｃｈｅｔｅｓ ｉｎ ｍｕｒｒａｙ ＰＲＥＭ］．８ｔｈ 社，２００１：１３２． ｅｄ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ：ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ，２００３：９５５—９７１． ［２１郭兑山，宁平，方德祥，等．梅毒螺旋体抗体ＩｇＣ－ＥＬＩＳＡ 叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床‘检验操作规程［Ｍ］．３ 和ＲＰＲ试验的比较［Ｊ］．中国输血杂志，２００１，１４（２）：８８ 版．南京：东南大学出版社，２００６：６５０． ８９． Ｅ３］周毅．老年梅毒螺旋体感染５１例调查与分析［Ｊ］．中国现 （收稿日期：２０１０—０７—１２）
