大鼠I型胶原酶联免疫分析试剂盒使用方式

检测范围：

20 ug/L -800 ug/L 使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠

I型胶原水平。用纯化的大鼠

I型胶原，再与

I型胶原抗体HRP标记的I

包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入

I型胶原含量。

96T

型胶原抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物的I型胶原呈正相关。用酶标仪在样品中大鼠I型胶原浓度。试剂盒组成1 2 3 4 5 6

30倍浓缩洗涤液酶标试剂酶标包被板样品稀释液显色剂A液显色剂B液

20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶

7 8 9 10 11 12

终止液

450nm波长下测定吸光度（

TMB显色。TMB

在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中

OD值），通过标准曲线计算

6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份2张1个

标准品（1600ug/L）标准品稀释液说明书封板膜密封袋

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含操作步骤1.

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，释。

5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品

用户可按照下列图表在小试管中进行稀

150μl标准品稀释液150μl标准品稀释液150μl标准品稀释液150μl标准品稀释液150μl标准品稀释液

NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（

HRP）活性。

800 ug/L 400 ug/L 200 ug/L 100 ug/L 50 ug/L

150μl的原倍标准品加入150μl的5号标准品加入150μl的4号标准品加入150μl的3号标准品加入150μl的2号标准品加入

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样然后再加待测样品

10μl（样品最终稀释度为

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

其余各步操作相同）、标准孔、

40μl，

50μl，待测样品孔中先加样品稀释液

5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

3.4.5.6.7.

温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

20倍稀释后备用

30秒后弃去，如此

配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂温育：操作同

3。

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置

50μl，空白孔除外。

8.9.

洗涤：操作同15分钟.

5。

A50μl，再加入显色剂

B50μl，轻轻震荡混匀，

。

OD值）。测定应在加终止

37℃避光显色

显色：每孔先加入显色剂

10.终止：每孔加终止液11.测定：以空白空调零，

50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）450nm波长依序测量各孔的吸光度（

液后15分钟以内进行。操作程序总结：

计算

以标准物的浓度为横坐标，准曲线的直线回归方程式，即为样品的实际浓度。注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡

用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好

控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本

OD值

15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD值计算出标

OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与

将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，

大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（

n×5）。

n倍）后再测定，计

算时请最后乘以总稀释倍数（×6．底物请避光保存。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月

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