２００５年１ ０月 重庆大学学报（自然科学版）Ｏｃｔ． ２００５第２８卷第１０期Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙｔ（ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ． ２８ Ｎｏ． １０文章编号：１０００一５８２Ｘ （２００５ ） １０一０１１１一０４浮萍多糖总糖含量测定与评价’周 等，王伯初，王阳（重庆大学生物工程学院教育部生物力学与组织工程重．点实验室，重庆４０００３０） 摘要：草本植物浮萍中提取的多糖类化合物经实验证明具有免疫增强活性．探索浮萍多精提取物总糖含量的测定方法并对该方法进行评价，同时将其用于浮萍多糖生产制备中的质Ｉ拉制．采用分光光度法，分别经苯酚一硫酸和葱酮一硫酸显色，测定浮萍多糖提取物中的总糖含量，并通过线性和范围、精密度、稳定性和准确度等指标评价该方法．实验结果显示苯酚一硫酸法和葱酮一硫酸法测浮萍多枪所需设备简单、操作快速、结果稳定、灵敏度高，可将其作为浮萍多糖提取物中总糖含量浏定的有效方法．关键词：浮萍；多糖；含量测定；评价中图分类号：８２８２．７１文献标识码：Ａ浮萍（ Ｈｅｒｂａ助ｉｒｏｄｅｌａｅ ｓｅｕ Ｌｅｍｎａｅ）为浮萍科植物１．２实验方法紫背浮萍（ Ｓｐｉｒｏｄｅｌａ Ｐｏｌｙｒｒｈｉｚａ （Ｌ．）Ｓｃ ｈｌｅｉｄ．）或青萍１．２．１浮萍多糖的提取分离（Ｌｅｍｍａ ｍｉｎｏｒ Ｌ．）的全草，在中国各地分布广泛、资源取粉碎后的浮萍药材，以１：２０的料水比加水， 丰富，作为传统中药人药．浮萍多糖〔１－ｚ］是本研究组从ＮａＯＨ调ｐＨ至９，沸水提取２次．合并滤液，减压浓缩，浮萍中提取的主要水溶性成分，经初步药效学试验，发滴加１０％三氯乙酸至ｐＨ ２一３，５一１０℃静置过夜后现浮萍多糖能够明显改善环磷酞胺致免疫力低下ＫＭ小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的功能，并显著提高离心取上清，超滤（截留分子量６０００），取浓缩液加人健康ＫＭ小鼠的碳粒廓清能力，提示浮萍多糖是一种４倍体积无水乙醇，冷藏静置后取沉淀，将沉淀溶于很有发展前景的免疫调节剂原料药．笔者采用硫酸－水，重复醇沉操作６次，取沉淀溶解后冷冻干燥得浅棕苯酚法和硫酸一蕙酮法对浮萍多糖中的有效部位即总色浮萍多糖粉末〔，一‘〕．糖的含量进行了测定，并通过线性和范围、精密度、稳１．２．２苯酚一硫酸法测定总糖含量定性和准确度等指标对两种方法进行了评价和比较．１）最大吸收波长的选择： 精密吸取一定浓度的样１材料与方法品溶液１．０ ｍＬ加人具塞试管，补水至２．０ ｍＬ，精密加人６％重蒸酚溶液１．０ ｍＬ，迅速加人浓硫酸５． ０ ｍＬ，１．１实验材料和主要仪器盖上塞，摇匀，静置１０ ｍｉｎ后，置３０℃水浴１０ ｍｉｎ，按 浮萍药材购自太极集团沙坪大药房，重庆大渡口分光光度法在３８０ －－ ５８０ ｒｕｎ波长范围内测定吸光度，中药材公司中药饮片厂，产地四川，经紫外光谱鉴别为紫萍Ｓｐｉｒｏｄｅｌａ Ｐｏｌｙｒｒｈｉｚａ （Ｌ．）Ｓｃｈｌｅｉｄ．的干燥全草；重确定其最大吸收波长，得Ａ二＝４８５ ｎｍ［５－８］．蒸苯酚（北京鼎国生物技术发展中心），葡聚糖（上海２）标准曲线的制备： 精密称取１０５℃干燥至恒重化学试剂公司，分子量２万），其余试剂均为分析纯，的葡聚糖对照品１００． ０ ｍｇ，置１Ｌ容量瓶中，加水适量实验用水为单蒸水、三蒸水和去离子水；电子分析天平使溶解，稀释至刻度，摇匀，得０．１岁Ｌ葡聚糖对照品（上海恒平科学仪器有限公司），７５６ＭＣ紫外可见分光溶液．精密吸取０．２０ ｍＬ，０．４０ ｍＬ，０．６０ ｍＬ，０．８０ ｍＬ，光度计（上海精密科学仪器有限公司）．１． ００ ｍＬ，１． ２０ ｍＬ，１． ４０ ｍＬ上述溶液加人具塞试管， 收稿日期：２００５－０５－２１作者简介： 周曹（１９７８一），女，重庆人，重庆大学博士研究生，主要从事天然药物化学方向研究．１１２重庆大学学报（自然科学版）２００５年补水至２．０ ｍＬ，照１）项下自“精密加人６％重蒸酚溶液１．０ ｍＬ”起，依此方法于４８５ ｎｍ处测定吸光度，同样处理蒸馏水为空白．以吸光度为纵坐标，糖的含量微克数为横坐标，得标准曲线，经计算回归方程为Ａ二０． ０５２ ２Ｃ一０． ０９３ ２，ｒ ＝０． ９９９ ７（ｎ＝７），葡聚糖浓度在２． ５１ －－１７． ５７ ｐ酬ｍＬ范围内与吸光度呈良好的线性关系． ３）样品测定：精密称取样品５０． ０ ｍｇ，置２５０ ｍＬ容量瓶中，加水适量使其溶解，稀释至刻度，摇匀．精密吸取上述溶液１．０ ｍＬ加人具塞试管，补水至２． ０ ｍＬ，照１）项下自“精密加人６％重蒸酚溶液１． ０ ｍＬ＂起，依法测定吸光度，随行空白，计算．１．２．３葱酮一硫酸法测定总糖含量１）最大吸收波长的选择： 精密吸取一定浓度的样品溶液０．５ ｍＬ加人具塞试管，补水至１．０ ｍＬ，精密加人４．００ ｍＬ，２ ｇ／Ｌ的葱酮试剂（２ｇ葱酮溶于１Ｌ浓硫酸），迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，盖上塞，自水浴重新煮沸起，准确煮沸１０ ｍｉｎ后立即取出，用自来水冷却，在暗处室温放置１０ ｍｉｎ后丁５２０ － ７２０ ｎ波长范围内测定吸光度，确定其最大吸收波长， ２）标准曲线的制备：得＊。。＝６２５ 精密称取１ｎｍ［５．９］．０５℃干燥至恒重的葡聚糖对照品１００． ０ ｍｇ，置１Ｌ容量瓶中，加水适量使溶解，稀释至刻度，摇匀，得０．１留Ｌ葡聚糖对照品溶液．精密吸取０．０５ ｍＬ，Ｏ． １０ ｍＬ，０．２０ ｍＬ，０．３０ ｍＬ，０．４０ ｍＬ，０． ６０ ｍＬ，０．８０ ｍＬ上述溶液加人具塞试管，补水至１． ０ ｍＬ，照１）项下自“精密加人４． ００ ｍＬ，２岁Ｌ的葱酮试剂”起，依法于６２５ ｒｕｎ处测定吸光度，同样处理蒸馏水为空白．以吸光度为纵坐标，糖的含量微克数为横坐标，得标准曲线，经计算回归方程为Ａ二０． ０３５ ７ Ｃ一０． ００８ ｌ， ｒ ＝０． ９９７ ７（ｎ＝７），葡聚糖浓度在２ － ２０ Ｒｇ／ｍＬ范围内与吸光度呈良好的线性关系． ３）样品测定：精密称取样品５０． ０ ｍｇ，置２５０ ｍＬ容量瓶中，加水适量使溶解，稀释至刻度，摇匀．精密吸取上述溶液１．０ ＭＬ加人具塞试管，照１）项下自“精密加人４． ００ ｍＬ， ２群Ｌ的葱酮试剂”起，依法测定吸光度，随行空白，计算．１．２．４测定方法的评价 １）精密度及总糖含量计算：取供试品溶液，按样品测定方法操作，一次开机后重复测定吸光度（ｎ二５），计算相对标准差ＲＳＤ得日内精密度；取供试液样品（ｎ＝５）置冰箱冷冻，自配制样品之日开始，按样品测定方法每天取出一份测定，计算相对标准差ＲＳＤ得日间精密度．根据日内吸光度测定值计算总糖平均含量［’。一川． ２）显色稳定性：取供试品溶液，按样品测定方法操作，每隔５ ｍｉｎ测定一次吸光度，共测１０次，观察吸光度有无明显变化．３）准确度： 采用加样回收率实验．精密称取葡聚糖标准品１０． ０ ｍｇ， １５． ０ ｍｇ， ２５． ０ ｍｇ， ３５． ０ ｍｇ，４０． ０ ｍｇ，分别置２５０ ｍＬ容量瓶中，加水适量使溶解，稀释至刻度．精密吸取０．５ ｍＬ已知含量的样品溶液，共５份，分别加人０．５ ｍＬ浓度不同的葡聚糖标准品溶液，摇匀．按样品测定方法测定吸光度，计算回收率平均值和相对标准差（ＲＳＤ）．按纯应用化学国际联合会（ＩＵＰＡＣ）所推荐的加样回收率（Ｒ）计算公式为：Ｒ＝〔（Ｍ一Ｐ）／Ａ］ ｘ １００％，式中，尸为一个已准确测定的药量；Ｍ为（Ａ十尸）药量混合后进行回收实验所得测定值的均值；；Ａ为标准品加人量．２实验结果２．１苯酚一硫酸法测定样品 １）精密度试验及样品总糖平均含量．精密度试验结果见表１．表１苯酚一硫酸法精密度试验结果 精密度吸光度均值ＲＳＤ／％日内精密度０．５７１０．６０９０．６２０ ０．５８３ ０．６４１０．６０５ ４．７日间精密度０．５８６０．６２１０．５４４ ０．５５９ ０．５９３０．５８１ １０．４样品总糖平均含量（Ｃ）的计算公式为：Ｃ＝〔（Ａ＋０． ０９３ ２） ／０． ０５２ ２）ｎＶＭ ｘ １００％，式中，Ａ为日内吸光度测定均值；ｎ为稀释倍数；Ｍ为待测样品质量，Ｒ，ｇ； Ｖ为样品溶液的总体积，ｍＬ．经计算样品总糖平均含量为５３．５％．２）显色稳定性试验； １０次吸光度测定值分别为０．５９９、０． ５９７、０． ５９８、０．６０１、０． ５９９、０． ６０２，０． ６００，０．５９６，０．５９５，０．５９３，４０ ｍｉｎ内显色无明显变化．３）加样回收率试验： 见表２．表２苯酚一硫酸法加样回收率试验结果 样品量葡聚糖测定值／协９加人氢ｗｇ吸光度回收率平均回收／１Ｉ￥／％ 率／％，０ｎ ：０．３６９ ７０．９Ｏ工Ｕ臼了ｎ‘｝｝． ． Ｕ 内Ｊｎ ｎ０．４２８ ７９．９八Ｘ０ ｎ｝Ｕ户”．｝５３．５工、Ｊｎｌｆｌ０．５３８ ９６．７０｝‘０一６月｝…叶８６．６０．９９ｌｌｎｎ０．６４８ １１３．６０｝』０ｌｌ０：Ｊ子ＱＯｎｎ０．７０５ １２２．３八入｝‘｝Ｕｎ户２．２葱酮一硫酸法测定样品１）精密度试验及样品总糖平均含量．精密度试验 结果见表３．第２８卷第１０期周苦，等：浮萍多糖总糖含量测定与评价１１３表３葱酮一硫酸法精密度试验结果精密度吸光度均值日内精密度０．５２３ ０．４７７ ０．５５６ ０．５０３ ０．４９９ ０．５１２ ５．８日间精密度０．５２９ ０．５４８ ０．４７５ ０．４３８ ０．５０７ ０．４９９ ８．８样品总糖平均含量（Ｃ）的计算公式为：Ｃ＝〔（Ａ＋０．００８ １）Ｍ 些卫丝互ｎＶ ｘ １００％，式中，Ａ为日内吸光度测定均值；ｎ为稀释倍数；Ｍ为待测样品质量，ｍ； Ｖ为样品溶液的总体积，ｍＬ．经计算样品总糖平均含量为３６．４％．２）显色稳定性试验：１ ０次吸光度测定值分别为０． ５１６，０． ５２０，０． ５１７、０． ５１９、０． ５０４，０． ５０３、０． ４９７、・０．５０１，０．４８５，０．４７６，１５ ｍｉｎ内显色无明显变化・３）加样回收率试验： 见表４．表４葱酮一硫酸法加样回收率试验结果 样品量葡聚糖吸光度测定值回收率平均回收率／％２０ｎｎ户Ｕ ．内ｊ 一人Ｕ『了５２『、Ｊ吸ｎＵ ｝ ．门ｊ ３０ ｎ工Ｕ …二马，‘６０ 月产Ｏ０ 产０Ｊ胜孟…了０３６．４５０￣１１八｝Ｕ仁Ｊ月兮门了”月了０Ｄ，‘产０８０．７ １．７７０ｎ工Ｏ｝６口、，９２曰、Ｏ０，｝）‘）Ｏ‘８０．０ ０．７０３ ９９．６ ７９．０３讨论３．１测定方法的建立总糖含量测定是多糖类药物质量控制的重要指 标，也是保证其样品的稳定性的可靠依据．浮萍多糖总糖含量测定包括浮萍多糖提取物中的大部分多糖和少量低聚糖、单糖的测定．在对多糖和低聚糖的测定进行测定时，因得到相应的多糖和低聚糖对照品较困难，尤其当多糖组成不明或较复杂时，往往以测定其水解产物单糖来表示总糖的相对含量．笔者选用了苯酚一硫酸法和葱酮一硫酸法两种方 法进行浮萍多糖总糖含量测定研究，其基本原理是，糖类与强酸加热产生糠醛或糠醛衍生物，然后通过显色剂缩合成有色络合物，再进行比色定量［（６１．发色反应的机理迄今尚未了解，因而进行总糖定量分析时的操作条件有其经验性，应根据待检测的糖类的类型和实验条件选择适当的分析方法．苯酚一硫酸试剂与糖类反应产生黄橙色， 根据单糖组成的不同在４８０一４９０ ｎｍ处有最大吸收（戊糖和糖醛酸在４８０ ｎｍ，己糖在４９０ ｎ ），全部糖类都可以参加反应．葱酮一硫酸试剂与糖类反应产生蓝绿色，在６２０一６２５ ｎｍ处有最大吸收，参与反应的糖类主要是己糖［（６１．本实验中用分光光度法测定总糖含量时，苯酚一硫酸和蕙酮一硫酸两种显色方法对样品总糖含量测定结果的影响较大，这可能与浮萍多糖中的单糖组成有关．另外，对同多糖进行含量测定时制作标准曲线宜用相应的标准多糖或用校正系数校正，而对杂多糖而言，应按其单糖比配制成对照品溶液及主要单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算【５１．因为浮萍多糖的单糖组成尚未确定，故本实验含量测定方法有待进一步研究．３．２测定方法的评价生物样品含量测定方法在建立时应考虑主要的定 量分析方法认证的分析参数，如线性度和线性范围、精‘密度、准确度和稳定性等〔‘“一‘，〕．精密度是指用该方法测定同一匀质样品的一组测量值彼此符合的程度，通常以重复测定次数（ｎ｝－－ ５）的测定值的相对标准差（ＲＳＤ）来表示，并可分为日内精密度和日间精密度，日内精密度应争取达到５％以内，不能超过１０％，日间精密度应控制在巧％以内；准确度是指测得结果与真实值接近的程度，由于“真实值”无法准确知道，通常采用加样回收率试验来表示，其结果越接近１００％表明分析方法准确度越高，但实际上往往达不到１００％，生物样品分析时一般控制回收率范围为８５％一１１５％（样品药浓）２００ ＷＬ）及８０％一１２０％（样品药浓＜２００ ＷＬ）１＂＇，但只要每次测得的回收率稳定在某一水平上（甚至５０％以上）时也可采用，回收率的ＲＳＤ一般应为２％以内；线性度是在给定范围内获取与样品中供试物浓度成正比的试验结果的能力，目前广泛采用的表示方法是用标准曲线的相关系数（ｒ），要求控制ｒ：，；－０． ９９０ ０；显色反应中生成的有色物质经过一段时间后可能因为发生沉淀或分解而影响显色的稳定，显色稳定性用于评估实验中供试样品的稳定显色时间〔１４１．实验结果表明，苯酚一硫酸法和葱酮一硫酸法简单快速，显色稳定，精密度高，准确度较好，可以作为浮萍多糖总糖含量测定的有效方法．将两种显色方法进行比较又可以发现，葱酮试剂很不稳定，放置一段时间后就因氧化带有褐色，影响发色，故需当天配制，而苯酚一硫酸试剂虽也是临用现配，但相比之下更为稳定，操作也更简单，并且葱酮一硫酸法反应条件控制较严，如反应温度、显色时间、试剂和溶液的初始温度等因素对显色状态的影响比苯酚一硫酸法更为明显．参考文献：【１］ ＯＶＯＤＯＶＡ ＲＧ ， ＧＯＬＯＶＥＣＨＥＮＫＯ Ｗ， ＳＨＡＳＨＫＯＶ ＡＳ ，ｅ ｔ ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｙｔｏ ｆ Ｌｅｍｎａｎ， Ｌｅｍ－ｎａ Ｍｉｎｏｒ Ｌ． Ｐｅｃｔｉｎ〔Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇ Ｋｈｉｍ， ２０００，２６（１０）：７４３一７５１． ［ ２ ］ ＧＯＬＯＶＥＣＨＥＮＫＯ Ｗ， ＯＶＯＤＯＶＡ ＲＧ ， ＳＨＡＳＨＫＯＶ ＡＳ ，１１４重庆大学学报（自然科学版）ｅｔ ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｅｃｔｉｃ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ２加５年Ｄｕｃｋｗｅｅｄ Ｌｅｍｎａ Ｍｉｎｏｒ Ｌ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｙｒ， ２００２，６０；８９一９７． 中草药，１９９６， ２７（２）：８５一８６．［９］ ＭＡＺＵＭＤＥＲ Ｓ， ＧＨＯＳＡＬ ＰＫ， ＰＵＪＯＬ ＣＡ， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａ－ｔ ｉｏｎ， Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｐｏｌｙ－ｓ ａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｒｆｏｍ Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ Ｃｏｒｔｉｃａｔａ（Ｇｒａｃｉｌａｎａｃｅａｅ， Ｐｈｏ－［３］ＸＵ ＨＸ， ＬＥＥ ＳＨＳ， ＬＥＥ Ｓ Ｆ， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃ－ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ Ａｎｔｉ－ＨＳＶ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｐｒｕｎｅｌｌａ Ｖｕｌ－ｄ ｏｐｈｙｔａ） ［ Ｊ ］．Ｉｎｔｅｎｒａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌ哈ｃａｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅ－ｃｕｌ ｅｓ， ２００２，３１：８７一９５．ｇｒｉｓ ［ Ｊ ］．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， １９９９，４４， ４３一５４．ＮＩ Ｌ， ＧＩＬＬＪ Ｒ， ＧＯＭＢＡＣ Ｖ， ｅｔ ａｌ． Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａ－［４］ＮＡＶＡＲＩｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｈｏｔ Ｗａｔｅｒ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ Ｒｏａｓｔｅｄ Ｃｏｆｆｅａ Ａｒａｂｉｃａ［１０］刘文英．药物分析【Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００２．［１１〕刘昌孝．药物评价实验设计与统计学基础【Ｍ］．北京：军事医学科学出版社，２００１． Ｂｅａｎｓ： Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＰｏｌｙｍｅｒｓ， ２００３，（３）：７１一８１．［５〕张惟杰．糖复合物生化研究技术【Ｍ］．杭州：浙江大学 出版社，１９９９．［６］吴平．食品分析【Ｍ］． Ｉ晾：轻卫业出版社，１９８３． １，一１６５．［７］汪显阳，姚春艳，张佩文．六味地黄丸中多糖含量测定研究［ Ｊ］．中医药研究，２０００， １６（４）：４２一４５．［８］何进，梁运祥，阎淳泰．拘祀多糖中中性糖的含量测定【Ｊ］．［１２〕李晓晖，李书平，何云庆，等．灵芝多糖的含量测定研究［ Ｊ］．中草药，１９９７， ２８（９）：５３０一５３１．［１３」曾经泽．生物药物分析【Ｍ］．北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，１ ９９８．［１４］梁生旺，刘伟．中药制剂定量分析【Ｍ］．北京：中国中医药出版社，２００１． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆＨｅｒｂａ Ｓｐｉｒｏｄｅｌａｅ Ｓｅｕ Ｌｅｍｎａｅ ＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓＺＨＯＵ Ｊｉｎｇ， ＷＡＮＧ Ｂｏ－ｃｈｕ， ＷＡＮＧ Ｙａｎｇ（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙｔ， Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｃｈａｎｉｃｓ＆Ｔｉｓｓｕｅ ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＵｎｄｅｒ ｔｈｅ Ｓｔａｔｅ Ｍｉｎｉｓｔｙ ｒｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００３０，Ｃｈｉｎａ）ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｉｓｏｌａｔｅｄＡｂｓｔｒａｃｔ：玩ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｓｅａｒｃｈｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｆｒｏｍ ｎａｔｕｒａｌ ｈｅｒｂａｌ ｓｏｕｒｃｅｓ， ｔｈｅｐｏｌｙａｉｍａｔ ｉｉｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｈａｔｒｆｏｍ ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｄｕｃｋｗｅｅｄ（Ｈｅｒｂａ Ｓｐｉｏｒｄｅｌａｅ ｓｅｕ Ｌｅｍｎａｅ）．Ｔｈｅ ａｕｔｈｏｒｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｘｔｕｒｅ， ａｃｃｏｒｄｉｎ脚，ｔｏ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｑｕａｌｉｙｃｔ ｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｆｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｄｕｃｋｗｅｅｄ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｍｅｎｓｕｒａｔｅｄ场ｓｐｅｒｔｒｏｐｈｏ－ｔｏｍｅｔｙｏｒ ｆ ｓｕｌｐｈｕｒｉｃ ａｃｉｄ－ｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｓｕｌｐｈｕｒｉｃ ａｃｉｄ－ａｎｔｈｒｏｎｅ． Ａｎｄ ｔｈｅ ｖａｌｉｄｉｔｉｙ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｏｍｅｉｎｄｅｘｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ａｎｄ ｒａｎｇｅ，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ， ｓｔａｂｉｌｉｙ， ｔａｎｄ ａｃｃｕｒａｃｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｒｅ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ， ａｎｄ ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｔｈｅｒｅｂｙ ｌｅａｄｉｎｇ ｔｏ ａ ｗｉｄｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｕｓｅ ｉｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｈｅｒｂａ Ｓｐｉｒｏｄｅｌａｅ ｓｅｕ Ｌｅｍｎａｅ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｈｅｒｂａ Ｓｐｉｒｏｄｅｌａｅ ｓｅｕ Ｌｅｍｎａｅ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｉｒｄｅｓ； ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（编样陈移峰）