一、理化指标的检验(无特殊说明水为蒸馏水)
1、酒精度的检验(密度瓶法)
原理:通过蒸馏除去样品中的不挥发物质,用密度瓶测定出馏出液的密度。根据馏出液的密度,查表1,求得20℃时酒精度。用%(体积分数)表示。 仪器:分析天平(感量0.0001g),全玻璃蒸馏器(500ml),附温度及密度瓶(50ml) 操作步骤:
用100ml容量瓶准确量取100ml样品于500ml蒸馏瓶中,用50ml水分三次冲洗容量瓶,洗液全部并入蒸馏瓶中。连接冷凝器,以取样用容量瓶做接收器。开启冷凝水,缓慢加热蒸馏。收集馏出液接近刻度,取下容量瓶,补加水至刻度。
将密度瓶洗净、干燥,带温度计和侧孔罩称量,至恒重。
将密度瓶中加入蒸馏水,于20℃时用滤纸吸去侧管中流出的液体,盖上侧孔罩,擦干瓶壁上的水,称量出水与密度瓶的重量。
将密度瓶中的水倒出,用试样冲洗密度瓶3~5次,装满,于20℃称量。 计算:
2020m2mA998.2m1mAm1mA1.2997.0
2020——样品在20摄氏度时的密度,g/ml;
m——密度瓶的质量,g;
m1——20℃时密度瓶与水的质量,g; m2——20℃时密度瓶与试样的质量,g; 所得结果应保留至一位小数。
2、总糖和还原糖的测定(菲林试剂法)
原理:利用菲林溶液与还原糖共沸,生成氧化亚铜沉淀的反应,以次甲基蓝为指示剂,以样品或经水解后的样品滴定煮沸的菲林溶液,达到终点时,稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色,根据样品消耗量求得总糖或还原糖的含量。
试剂和材料:盐酸(1+1),NaOH溶液(200g/L),葡萄糖标准溶液(2.5g/L,称取在105℃~110℃烘箱内烘干3h并在干燥器中冷却的无水葡萄糖2.5g,用水溶
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解至1000ml),次甲基蓝指示液(10g/L),菲林试剂(Ⅰ、Ⅱ)。 操作步骤: a):标定
预备试验:吸取菲林试剂Ⅰ、Ⅱ各5.00ml于250ml三角瓶中,加50ml水,摇匀,在电炉上加热至沸,在沸腾状态下用葡萄糖标准溶液滴定,当溶液的蓝色消失呈砖红色时,加2滴次甲基蓝指示液,继续滴定至蓝色消失,记录消耗葡萄糖标准溶液的体积。
正式试验:吸取菲林试剂Ⅰ、Ⅱ各5.00ml于250ml三角瓶中,加50ml水和比预滴定少1ml的葡萄糖标准溶液,加热至沸,保持2min,加次甲基蓝指示液,在沸腾状态下于1min内用葡萄糖标准溶液滴定至终点。记录消耗葡萄糖标准液的总体积。
菲林试剂Ⅰ、Ⅱ各5ml相当于葡萄糖克数的计算:
FmV 1000F——菲林试剂Ⅰ、Ⅱ各5ml相当于葡萄糖的克数,g; m——称取无水葡萄糖的质量,g; V——消耗葡萄糖标准溶液的总体积,ml。 b):试样的制备
测总糖用试样:准确吸取10ml的样品于100ml容量瓶中,使之所含总糖量为0.2~0.4g,加5ml盐酸溶液,加水至20ml,摇匀。在68±1℃水浴上水解15min,取出,冷却,用NaOH调节至中性,调温20℃,加水定容备用。
测还原糖试样:准确吸取10ml样品于100ml容量瓶中,加水定容至刻度,备用。
c):样品的测定:
测量总糖,以试样代替葡萄糖标准溶液按照a)操作,记录消耗的体积。
对于干酒,吸取10ml的样品于预先装有菲林试剂Ⅰ、Ⅱ各5.00ml的250ml三角瓶中,再用葡萄糖标准溶液滴定,记录消耗葡萄糖标准溶液的体积。 计算:
X1=(F-cV)×1000
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X2=(F/V3)×10000
X1——干葡萄酒的还原糖的含量,g/L; X2——总糖含量,g/L;
F——菲林试剂Ⅰ、Ⅱ各5ml相当于葡萄糖的克数,g; c——葡萄糖标准溶液的浓度,g/mL; V——消耗葡萄糖标准溶液溶液的体积,mL; V3——消耗试样的体积。 所得结果应保留至一位小数。
3、干浸出物(比重法)
原理:用密度瓶法测定样品或蒸出酒精后的样品的密度,然后用其密度值查附录,求得总浸出物的含量,再从中减去总糖的含量,即得干浸出物的含量。 操作步骤:
使用蒸出酒精后的残液,或者取100ml样品蒸发至原体积的三分之一后取下。用水定容至100ml。
将密度瓶洗净、干燥,带温度计和侧孔罩称量,至恒重。
将密度瓶中加入蒸馏水,于20℃时用滤纸吸去侧管中流出的液体,盖上侧孔罩,擦干瓶壁上的水,称量出水与密度瓶的重量。
将密度瓶中的水倒出,用试样冲洗密度瓶3~5次,装满,于20℃称量。 计算:
11.00180ρ——20℃时样品的密度,g/L; ρ1——样品测量的密度,g/L;
1.00180——20℃时密度瓶提及的修正系数。
所得结果表示至一位小数。
4、总酸的测定
(1)电位滴定法
原理:利用酸碱中和原理,用氢氧化钠标准溶液滴定样品中的有机酸,以pH=8.2为滴定终点。根据消耗氢氧化钠溶液的体积,计算总酸含量。
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操作步骤:
吸取10.00ml样品于100ml烧杯中,加50ml水,插入电极,放入一枚转子,置于电磁搅拌器上,开始搅拌,用氢氧化钠溶液滴定。开始时滴定速度可稍快,当溶液pH=8.0后,放慢滴定速度,每次滴加半滴溶液至pH=8.2。 计算:
XcV7.5
X——样品中总酸含量(以酒石酸计),g/L; c——氢氧化钠标准溶液浓度,mol/L; V——滴定时消耗氢氧化钠溶液的体积,ml; 7.5=酒石酸摩尔质量/吸取样品体积,g/mol·ml。
所得结果保留至一位小数。
(2)指示剂法
原理:利用酸碱滴定原理,以酚酞做指示剂,用碱标准溶液滴定,根据碱用量计算总酸含量。 操作步骤:
吸取2ml样品于250ml三角瓶中,加入50ml水,同时加入2~3滴酚酞指示剂,摇匀后,立即用氢氧化钠标准溶液滴定至终点,并保持30s不变色。 计算:
XcV37.5
X——样品中总酸含量(以酒石酸计),g/L; c——氢氧化钠标准溶液浓度,mol/L; V——滴定时消耗氢氧化钠溶液的体积,ml; 37.5=酒石酸摩尔质量/吸取样品体积,g/mol·ml。
所得结果保留至一位小数。
5、挥发酸
原理:通过蒸馏的方式蒸出样品中的低沸点酸类即挥发酸,用碱标准溶液进行标定。若挥发酸含量接近或超过理化指标时,则需测定游离二氧化硫和结合二氧化硫,对结果进行修正,得出样品中挥发酸的含量。
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操作步骤:
吸取10ml样品在蒸发装置上进行蒸馏,收集100ml馏出液。将馏出液加热至沸,加入2~3滴酚酞,用0.05M NaOH标定至粉红色,30s不变色即为终点。 计算:
XcV160.0
10.00X——样品中实测挥发酸的含量(以乙酸计),g/L; c——氢氧化钠标准溶液的浓度,mol/L; V1——消耗氢氧化钠标准溶液的体积,ml; 60.0——乙酸的摩尔质量,g/mol; 10.00——西取样瓶的体积,ml。
所得结果保留两位有效数字。
若挥发酸含量接近或超过理化指标时,则需对结果进行修正。
X1Xc1V2321.875c2V3320.9375
VVX1——样品中真实挥发酸含量,g/L; X——实测挥发酸含量,g/L; c2——碘标准溶液浓度,mol/L; V——吸取样品的体积,ml;
V2——测定游离二氧化硫消耗碘标准溶液的体积,ml; V3——测定结合二氧化硫消耗碘标准溶液的体积,ml; 32——二氧化硫的摩尔质量,g/mol;
1.875——1g游离二氧化硫相当于乙酸的质量,g; 0.9375——1g结合二氧化硫相当于乙酸的质量,g。
所得结果保留两位有效数字。
6、游离二氧化硫(直接碘量法)
原理:利用二氧化硫与碘发生氧化还原反应的性质,测定样品中的二氧化硫的含量。
试剂和材料:1:3硫酸;0.02M碘标准溶液,淀粉指示液;配置好后再加入40gNaCl。
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操作步骤:
吸取25.00ml样品于250ml碘量瓶中,加入1ml淀粉指示剂和10ml硫酸,用电标准溶液迅速滴定至淡蓝色,保持30s不变即为终点。以水代替样品,做空白试验。 计算:
Xc(VV0)321000
25X——样品中游离二氧化硫的含量,mg/L; c——碘标准溶液的浓度,mol/L; V——消耗碘标液的体积,ml;
V0——空白试验消耗碘标准溶液的体积,ml; 32——二氧化硫的摩尔质量,g/mol; 25——吸取样品的体积,ml。
所得结果保留至整数。
7、总二氧化硫(直接碘量法)
原理:在碱性条件下,结合态二氧化硫被解离出来,然后用碘标准溶液滴定,得到结合二氧化硫的含量。
试剂和材料:100g/LNaOH溶液,其他与测定游离二氧化硫相同。 操作步骤:
吸取25.00ml氢氧化钠溶液于250ml容量瓶中,再准确吸取25.00ml样品,并以吸管尖插入氢氧化钠溶液的方式,加入到碘量瓶中,摇匀,盖塞,静置15min后,加入1ml淀粉指示液,10ml硫酸溶液,摇匀,用碘标准溶液滴定至淡蓝色,30s内不变即为终点。以水代替样品做空白试验。 计算:
Xc(VV0)321000
25X——样品中游离二氧化硫的含量,mg/L; c——碘标准溶液的浓度,mol/L; V——消耗碘标液的体积,ml;
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V0——空白试验消耗碘标准溶液的体积,ml; 32——二氧化硫的摩尔质量,g/mol; 25——吸取样品的体积,ml。
所得结果保留至整数。
8、铁、铜的检验。参照GB/T—15038-2006 9苹果酸层析实验
原理:将葡萄酒以小圆点的形式分布在滤纸上,滤纸的一段进入特殊展开剂中,随着展开剂在滤纸上的移动,有机酸就会以不同的速度分布在滤纸上,从而进行分离。
酒石酸的速度最慢,离葡萄酒小圆点最近。 乳酸、琥珀酸最快,被展开剂推动至滤纸顶端。 苹果酸位于二者之间。 试剂和器具:
沃特曼1号滤纸,层析缸或者一个可以密闭的瓶子,微吸管,电吹风,正丁醇,50%乙酸,溴酚蓝。
展开剂:1L正丁醇中加入1g溴酚蓝混合,再以50ml混合液与25ml50%乙酸混合,制得展开剂。 操作步骤:
将配置好的展开剂装入层析缸中,封严。在滤纸下端4~5cm处滴上待分析的样品,每滴样品之间的距离为3~4cm,最中间一滴为苹果酸,作对照。每种样品直径控制在5mm以下。用电吹风吹干样品,然后重新滴加样品,重复滴加8~10次。
将点好样品的滤纸卷成筒状,固定。滤纸的两端不能相互接触。将滤纸轻轻放入层析缸中,使滤纸不触及缸的内壁,样品也不进入展开剂中,然后密封。当展开剂移动到离滤纸顶端1~2cm时,取出滤纸,放在通风处干燥。滤纸变为蓝色时,上面的黄色斑点即为有机酸。
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二、有关试剂的配置和标定(无特殊说明水指蒸馏水,酒精为无水乙醇)
菲林试剂的配置
甲液:称取CuSO4·5H2O69.278g,加水溶解,定容至1000ml,摇匀,过滤
后装于棕色瓶中,备用。
乙液:称取346g酒石酸钾钠(C4H4KNaO6·4H2O)和NaOH100g,加水溶
解,定容至1000ml,摇匀,过滤后用橡皮塞塞紧,备用。 2、30%NaOH:称取30gNaOH,加水溶解定容至100ml。 3、20%盐酸:量取46ml盐酸,加水定容至100ml。 4、1%次甲基蓝:称取1g次甲基蓝,加水定容100ml。 5、1%酚酞:称取1g酚酞用酒精定容100ml。
6、0.05M NaOH:称取2gNaOH加水溶解,定容至1000ml。 0.05M NaOH的标定:
将苯二甲酸氢钾在105~110℃烘箱中烘3h,放在干燥器中备用。取0.1500~0.2000g三份,放入200ml烧杯中,加50ml水,溶解后加入1%酚酞2滴,用0.05M NaOH滴至粉红色。
MW
0.204VM——NaOH的摩尔浓度,mol/L; W——苯二甲酸氢钾的质量,g; V——NaOH消耗的体积,ml;
0.204——每毫摩尔苯二甲酸氢钾的质量,g。
7、1%淀粉:称取1g可溶淀粉,加水溶解,并加热至透明,冷却后定容至
100ml。
8、1:3硫酸:1体积浓硫酸加入3体积水中。
9、30%碘化钾:称取30g碘化钾,加水溶解,定容至100ml。
10、2.5M(100g/L)NaOH:称取100gNaOH,加水溶解,定容至1000ml。 11、0.2M硫酸:量取12ml浓硫酸注入200ml水中,冷却后定容至1000ml。 12、0.02M碘液:称取2.6g碘和7g碘化钾,加水溶解,定容至1000ml,装
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入棕色瓶中备用。 0.02M碘液的标定:
吸取10ml碘液于250ml碘量瓶中,加水10ml,用标定过的硫代硫酸钠滴定至微黄色,加入淀粉2~3滴,继续滴定至蓝色消失。
MM1V10
M——碘液的摩尔浓度,mol/L;
M1——硫代硫酸钠的实际摩尔浓度,mol/L; V——消耗硫代硫酸钠的体积,ml; 10——碘液体积,ml。
13、0.01M硫代硫酸钠:称取硫代硫酸钠2.6g,溶于1000ml水中,缓慢煮
10min,放置2周后,过滤,备用。 0.01M硫代硫酸钠的标定:
称取于120℃烘至恒重的基准重铬酸钾0.4903g,溶于水,并定容至1000ml。吸取重铬酸钾15ml于250ml碘量瓶中,加入30%碘化钾2ml和0.2M硫酸20ml,摇匀,于暗处放30min后加水50ml,用0.01M硫代硫酸钠滴至浅黄色,加1%淀粉0.5ml,继续滴定至蓝色消失。同时做空白试验。
MW15/1000
(V1V0)0.0490M——硫代硫酸钠实际摩尔浓度,mol/L; V1——消耗硫代硫酸钠的体积,ml; V0——空白试验消耗硫代硫酸钠的体积,ml; W——重铬酸钾的质量,g;
0.0490——相当于0.2mmol的重铬酸钾质量,g/mmol。
14、0.5%:吸取8ml定容至1000ml。
15、无菌生理水:称取8.5gNaCl溶解并定容至1000ml,于121℃灭菌15min。 1mol/L盐酸:吸取90ml浓盐酸加水定容至1000ml。 1mol/LNaOH:称取40gNaOH加水溶解并定容至1000ml。
参照GB/T601-2002 、GB/T603-2002。
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