猪旋毛虫病4种检测方法的比较

第１４卷第１期　２００６年１月　巾国兽医寄生虫病　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ　ＶｏＩ．１４　Ｎｏ．１　Ｊａｎ　２００６　猪旋毛虫病４种检测方法的比较　邓瑞广　，　张改平　，　赵　东　，　张和平　，　王海利。　（１．河南省农业科学院生物技术研究所。郑州４５０００２；２．平顶山市畜牧局。平顶山４６７０００；　３．南阳市城区动物检疫站，南阳４７３０００）　摘要：　目的试验比较快速试纸条法、快速ＥＬＩＳＡ法、常规镜检法和人工胃液消化法检测猪旋毛虫病效果。方　法　采用上述４种方法分别对１　５６６头屠宰猪作旋毛虫病的检测。结果　旋毛虫检出率分别为１　６６％、１．６６％、　１．２１％和１．６０％。结论快速试纸条法具有特异、敏感、快速、简便的特点，用于现场检测可收到立等可取的效果。　关键词：旋毛虫病；检测方法；对比试验；试纸条法；ＥＬＩＳＡ　中图分类号：￥８５５．９３１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５－０８６８（２００６）０１－０００５－０３　ＣＯＭＰＡＲＩＳＯＮ　ＴＥＳＴ　ＯＦ　ＤＥＴＥＣＴＩＮＧ　ＳＷＩＮＥ　ＴＩＵＣＨＩＮＥＬＬＯＳｉＳ　ＷｒｒＨ　ＦＯＵＲ　ＭＥＴＨＯＤＳ　ＤＥＮＧ　Ｒｕｉ—ｇｕａｎｇ。ＺＨＡＮＧ　Ｇａｉ．ｐｉｎｇ。，ＺＨＡＯ　Ｄｏｎｇ。，，ＺＨＡＮＧ　Ｈｅ—ｐｉｎｇ　，ＷＡＮＧ　Ｈａｉ—ｌｉ　（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ，ｆｔｅｎａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５０００２，Ｃｈｉｎａ；２．Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　Ｂｕｒｅａｕ　ｆ　ｏＰ　Ｄｉｎｇｓｈａｎ，　Ｄｉｎｇｓｈａｎ　４６７０００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｉａｌｍ　Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ　ｉｎ　Ｎａｎｙａｎｇ　Ｃｉｔｙ，Ｎａｎｙａｎｇ　４７３０００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｈｅ　ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｅｓｔ　ｉｓ　ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌｏｓｉｓ　ｗｉｔｈ　ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｓｔｒｉｐ，　ＥＬＩＳＡ．ｇｅｎｅｒａｌ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ａｎｄ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙ　ｐｅｐｓｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　１　５６６　ｓｗｉｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｂｏｖｅ　ｆｏｕｒ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅ－　ｓｕｉｔｓ　Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　ｉｓ　１．６６％．１．６６％．１．２１％ａｎｄ　１．６０％ｓｅｖｅｒａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｂｏｖｅ　ｆｏｕｒ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｓｔｒｉｐ　ｐｏｓ－　ｓｅｓｓｅｓ　ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｈｉｇｈ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ｔｈｅ　ｓｔｒｉｐ　ｉｓ　ｅａｓｙ　ｔｏ　ｐｅｒｆｏｒｍ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｄｏｎｅ　ｉｎ　３～５　ｍｉｎｕｔｅｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｓｐｏｔ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌｏｓｉｓ；Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ；Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｔｅｓｔ；Ｓｔｉｐ；ＥＬＩｒＳＡ　旋毛虫病是一种人畜共患的重要寄生虫病，它　可在人和多种哺乳动物之间广泛传播，使养猪业、肉　食品经营和外贸出口等蒙受巨大的经济损失，同时　１材料和方法　１．１材料　还直接威胁人类的身体健康和生命安全。旋毛虫病　猪是人体旋毛虫的主要感染源，因此猪旋毛虫病检　疫在人、畜旋毛虫病的控制和预防以及促进养猪业　发展和对外贸易等方面有着不可忽视的作用。为了　１．１．１试验动物１　５６６头屠宰猪。　１．１．２主要器材和试剂　组织捣碎机、倒置显微　镜、水浴锅、分液漏斗、培养皿、盐酸、胃蛋白酶等。　１．１．３　ＥＬＩＳＡ快速检测试剂盒河南省农业科学　河南省农业　筛选操作简便、特异性强、灵敏度高且能进行旋毛虫　病现场检疫的先进方法，我们用常规镜检法、人工胃　液消化法、快速酶联免疫吸附法（快速ＥＬＩＳＡ）和快　速试纸条法进行了对比试验，现将结果报告如下。　院生物技术研究所制备提供。　１．１．４旋毛虫抗体快速检测试纸条科学院生物技术研究所制备提供。　１．２方法　１．２．１　快速试纸条法检样血清作５０～１００倍稀　释，全血作２Ｏ～５Ｏ倍稀释。检验时将试纸条测试端　收稿日期：２００５－０４－２８　按箭头所指方向浸入装有样品（血清或全血）的小　管中，使测试端吸水部分完全被样品液浸湿，约１Ｏ　维普资讯 http://www.cqvip.com

中国兽医寄生虫病　２００６年１月　～２０　ｓ取出平放，经３～５　ｒａｉｎ即可判定结果。凡在　试纸条显色区出现２条棕红色反应线，即阳性线和　对照线时判为阳性，如只出现１条对照线时判为阴　性结果。　１．２．２快速ＥＬＩＳＡ法检样血清作５０～１００倍稀　释，全血作２Ｏ～５Ｏ倍稀释。检验时每孔加检样１００　，静置３　ｍｉｎ，甩去被检液，每孔加１号液１滴，放　置３　ｍｉｎ，甩去１号液后每孔加２号液１滴，立即用　蒸馏水反复冲洗５次，拍干残液，每孔先加３号液１　滴，再加４号液１滴，轻轻混匀，静置５　ｍｉｎ进行判　定。同时，作标准阳性和阴性对照。　１．２．３常规镜检法取每头猪的膈肌作为样品，撕　去肌膜和脂肪，每个肉样剪取２４个小肉粒，然后进　行压片镜检。　１．２．４人工胃液消化法　以试纸条法检测为阳性　的样品，取膈肌肉样逐头单独消化；试纸条法检测阴　性的样品进行集样消化，发现虫体时再对这一组样　品逐头消化进一步复检，直至检出虫体对应的病猪。　逐头消化时，每头猪采膈肌２０　ｇ；集样消化时，每头　猪先取膈肌肉样１００　ｇ，再从每个肉样上剪取５　ｇ小　样，集中２Ｏ个小样为一组进行实验。将样品用组织　捣碎机捣碎置于烧杯中，杯内盛有预热至４２。ｃ～　４５。Ｃ的人工胃液（肉样与消化液的比例＝ｌ：２０），　然后在４２。Ｃ一４５。Ｃ的水浴锅中消化３０　ｍｉｎ，不断　搅拌，消化后自然沉淀４０　ｍｉｎ，用吸管吸取上清液　２／３丢弃，剩下的液体经６Ｏ目筛孔滤器过滤于分液　漏斗中，在室温下沉淀４０　ｍｉｎ，再移于同样漏斗中沉　淀４０　ｍｉｎ，最后将沉淀液注入培养皿中，在实体显微　镜下检查。　２结果　２．１　４种检测方法对比试验结果　分别用快速试　纸条法、快速ＥＬＩＳＡ法、常规镜检法和人Ｌ消化法　对１　５６６头出栏屠宰猪进行旋毛虫病检测，结果分　别检出２６、２６、ｌ９和２５头阳性病例。其中，快速试　纸条法、快速ＥＬＩＳＡ法与人工消化法３种检测方法　的检测结果基本一致，常规镜检法漏检率相对较高，　．ｂ消化法相比漏检了２－４．０％（６／２５），与试纸条法和　ＥＬＩＳＡ法相比均漏检　２６．９％（７／２６）。详见表Ｉ。　２．２试纸条法检测不同样品试验结果　用试纸条　法分别检测２６头旋毛虫阳性和ｌ５头旋毛虫阴性猪　的全血、血清样品，２种样品的检测结果安全一致，　详见表２。　表１　４种方法检测结果　（头、％）　表２试纸条法检测不同样品试验结果单位：头，％　阳性样品　阴性样品　样品——————　检测头数阳性数阴性数检测头数阳性数阴性数　３讨论与小结　３．１据有关报道，人工胃液消化法的敏感度只能检　出１　ｇ肌肉含１条幼虫以上的样品¨　。本试验结果　显示，人工胃液消化法检出２５头旋毛虫阳性猪，和　试纸条法检出的２６头旋毛虫阳性猪相差ｌ头，是由　于此头猪的荷虫量在每ｇ肌肉含幼虫不到１条所引　起，还是其他原因造成，有待进一步试验证明。　３．２本试验结果表明，用试纸条法检测猪的全血和　血清样品，检出的阴、阳性旋毛虫病结果完全相符。　因此，猪全血和血清样品均可用于检测旋毛虫病。　３．３镜检法是肉品旋毛虫检疫最常用的传统方法，　其主要优点为设备简单，便于掌握操作，直观性强，　容易定性和定量。缺点是漏检率较高，仅能检出１　ｇ　肌肉含３条以上幼虫的样品　ｊ，而且检出率的高低　受检疫员的工作经验和责任心影响较大。在实践中　如果责任心不强，旋毛虫寄生的密度比较小时，很容　易漏检。镜检法适合于中度和重度感染的猪。人工　胃液消化法的主要优点是检出率高，直观性强，既能　定性又能定量。缺点是需要试剂多，操作繁琐，检测　过程花时间长，且不能用于生前检测。ＥＬＩＳＡ法检　测速度快、灵敏性高、特异性强，可用于猪的生前检　测‘¨　。但操作过程仍然复杂，需要附带１、２、３、４号　液和标准阴、阳性对照血清等试剂，需要有一定技术　水平的人员进行操作。试纸条法与前３种方法相　比，具有更多的优越性，第ｌ简便实用，检测不需要　任何仪器和试剂，不需要专业技术人员和实验室，　随时随地进行现场检测；第２结果直观，容易判断：　维普资讯 http://www.cqvip.com

第１４卷第１期　邓瑞广等：猪旋毛虫病４种检测方法的比较　～７一　奶牛球虫病的综合防治　陈丽萍，　韩秀军，　陈立勋，　张　琪　（黑龙江省克东县畜牧水产局。克东１６４８００）　中图分类号：￥８５８．２３５．９２３　文献标识码：Ｃ　文章编号：１００５￣８６８（２００６）０１－０００７￣１　牛球虫病的病原寄生在牛小肠下段和整个大肠　直肠粘膜，见大量球虫卵囊，故确诊为牛球虫病。　治疗对患病的８头成年母牛和５头犊牛及时　的上皮细胞内，在多雨季节，长期在低洼、多沼泽的　草句上放牧，或牛舍潮湿，均极易引起此类疾病的发　生。常以出血性肠炎为特征，主要发生于犊牛。克　东县玉岗镇北兴村奶牛养殖小区王某饲养的２２头　奶牛，于２００５年６月，有９头成年母牛和５头犊牛　陆续发生以血便为主症的疾病，到８月１０日，死亡　１头。　用氨丙啉治疗，按２５　ｍｇ／ｋｇ体重内服，每日１次，连　服５日；重症牛用灭球液（华南农业大学实验兽药　厂生产，主要成分为磺胺二甲基嘧啶、甲氧苄啶）５　ｍＬ加水１Ｌ饮牛，每日１次，连服５日；同时内服　ＮａＨＣＯ３　１００　ｇ；对重泻的牛，内服鞣酸蛋白２０　ｇ／头，　１日１次，连用２日；５日后仃止便血，３０日后粪检　未见球虫卵囊。　临床症状　患牛发病初期，体温有时迭３９。Ｃ，　有时正常，精神沉郁，被毛松乱，粪便略稀，带少量血　丝，成年牛产乳量减少。其中一头母牛精神特别不　振，躯体消瘦，喜躺卧，反刍时而停止，带血稀便中混　综合预防　因成年牛多是带虫者，所以，犊牛和　成年牛分群饲养；舍饲期间，定期清理垫草、粪便，搞　好牛舍环境卫生，定期用３％～５％的热碱水或百毒　杀等对牛舍、地面、牛栏、饲槽等进行消毒；搞好饲料　和饮水卫生，避免被牛粪污染；更换饲料时要注意逐　步过滤，避免因突然变换饲料而引发球虫病；尽量少　有纤维性薄膜，伴有恶息，后期体温下降，用抗生素　治疗无效，最终死亡　剖检变化剖检牛尸体，见肛门外翻；后肢和肛　周被黑色血便污染；直肠粘膜肥厚、出血，内容物呈　在或不在潮湿、多沼泽的草场上放牧；哺乳母牛乳房　要经常擦洗，避免被粪便、垫草污染，以防犊牛染病。　褐色，恶息；心、肝、肾等未见异常。　诊断根据临床症状和剖检变化及镜检粪便和　收稿日期：２００５－１）９—２６