２０１５年５月第１７卷第５期 中国现代中药Ｍｏｄｅｍ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｍａｙ ２０１５ Ｖｏ１．１７ Ｎｏ．５ ・基础研究・ 杨梅素影响ＥＡ．ｈｙ９２６人血管内皮细胞增殖、 侵袭迁移及微管形成的实验研究△ 秦笑 ，陈关娟 （１．南京中医药大学基础医学院，江苏 南京２１００２３） （２．南京中医药大学江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心，江苏 南京２１００２３） ［摘要］ 目的：探讨杨梅素抗肿瘤血管新生的作用机制。方法：用不同浓度的杨梅素作用于体外培养的 ＥＡ．ｈｙ９２６人血管内皮细胞株，采用ＭＴＴ法观察药物对细胞的增殖抑制作用，划痕法及ｔｒａｎｓｗｅ１１小室实验观察药物 对细胞侵袭迁移能力的影响，ｔｕｂｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ法观察药物对微管形成的影响。结果：杨梅素对ＥＡ．ｈｙ９２６细胞的增殖、 侵袭迁移及血管生成呈浓度依赖性抑制，尤其在高浓度下（１ ｍＭ）其抑制作用最显著（Ｐ＜０．０１）。结论：杨梅素的抗 肿瘤血管生成作用不仅通过抑制内皮细胞的增殖，而且通过抑制内皮细胞的侵袭迁移及微管样结构的形成来实现。 ［关键词］ 杨梅素；血管内皮细胞；增殖；侵袭／迁移；血管生成 Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ｏｎ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ＥＡ．ｈｙ９２６ ｃｅｌｌｓ ＱＩＮ Ｘｉａｏ ，ＣＨＥＮ Ｍｅｉｊｕａｎ （１．Ｔｈｅ Ｐｒｅ—ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅ￣ｉｔｙ ｏｆＣｈｉｅｓｎｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｉｆｎｇ ２１００２３，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｊｉａｎｇｓｕ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ Ｄ厂Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｅ（ＴＣＭ）Ｐｒｎｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ， Ｎａｎｊｉｎｇ 劫ｅ ｏｆＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａ ｎｇ ２１００２３，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｙｒｉｅｅｔｉｎ Ｏｉｌ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＥＡ．ｈｙ９２６ ｅｅｌｌｓｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＭＴｒ ａｓｓａｙ，ｔｒａｎｓｗｅｌｌ ａｓｓａｙ ａｎｄ ｍａｔｒｉｇｅｌ ｔｕｂｅ—ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｂｅ．ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ＥＡ．ｈｙ９２６ ｃｅｌｌｓ．Ｇｅｌａｔｉｎ ｚｙｍｏｇｒａｐｈｙ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｙｒｉｅｅｔｉｎ ｏｎ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｍａｔｉｒｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－２（ＭＭＰ－２）ａｎｄ ｍａｔｉｒｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９（ＭＭＰ一９）．Ｒｅｓｕｌｔｓ： Ａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ １ ｍｍｏｌｆＬ，ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｂｅ—ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ＥＡ．ｈｙ９２６ ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜０．Ｏ１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｎ￣ｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ＥＡ．ｈｙ９２６ ｃｅｉｌｓ ｍａｉｎｌｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ， ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｂｅ—ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ＥＡ．ｈｙ９２６ ｃｅｌｌｓ． ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｍｙｒｉｅｅｔｉｎ；ＥＡ．ｈｙ９２６ ｃｅｌｌｓ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｉｎｖａｓｉｏｎ；ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｄｏｉ：１０．１３３１３／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４８９０．２０１５．５．００７ 杨梅素（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）化学名为３，５，７，３ ，４ ， ５ ．六羟基黄酮，是一种重要的黄酮醇类化合物，广 泛存在于多种天然植物中。现代药理学研究表明， 株ＥＡ．ｈｙ９２６进行干预，通过ＭＴＴ法、ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室 法、ｔｕｂｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ法等体外实验观察杨梅素对细胞 增殖、侵袭迁移及微管形成的影响，进一步探讨杨 梅素抗肿瘤血管生成作用的机理。 １材料 其具有广泛的药理活性。据报道，杨梅素可以通过 抑制肿瘤细胞的生长与增殖、促进其凋亡等途径发 挥抗肿瘤作用 引，但杨梅素对肿瘤血管新生的抑制 作用少有报道。 本研究用不同浓度的杨梅素对人血管内皮细胞 １．１细胞株 ＥＡ．ｈｙ９２６人血管内皮细胞株购于苏州大学医学 ［基金项目］ 江苏省高校优势学科建设工程项目（ＰＡＰＤ）；江苏自然基金（ＢＫ２０１３１４１５）；欧盟第七框架项目（ＰＩＲＳＥＳ－ＧＡ一 ２０１３－６１２５８９） ［通信作者］ 陈美娟，博士，副教授，研究方向：中医药抗肿瘤及其机制；Ｅ—ｍａｉｌ：ｍｊｃｈｅｎ９６８０＠ｓｉｎａ．ｃｏｎ ・４４０・ ２０１５年５月 第ｌ７卷第５期 中国现代中药Ｍｏｄｅｒｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｍａｙ ２０１５ Ｖｏ１．１７ Ｎｏ．５ 部，培养于含有１０％的胎牛血清、１％的羟乙基哌嗪 ２．３杨梅素对血管内皮细胞管腔形成的影响 乙硫磺酸缓种液（ＨＥＰＥＳ）、青霉素（５０ ＩＵ・ｍＬ ）、 链霉素（１００ Ｕ・ｍＬ ）的１６４０培养基中，５％ＣＯ２、 ３７℃恒温培养。 １．２药物与试剂 鼠尾胶原蛋白凝胶的制备（以１ ｍＬ为例）：取 ２００ 鼠尾胶原蛋白，置于冰浴的离心管中，加入 ６９０ Ｌ蒸馏水，立即混匀，加入到含１２ Ｌ浓度为 ０．１ ｍｏｌ・Ｌ 的氢氧化钠（ＮａＯＨ）溶液中，混匀，再 加入１００ Ｌ的１０×ＰＢＳ，７昆匀，每孑Ｌ １００ Ｌ种于 ９６孔板。先置于２５℃２０ ｍｉｎ，再置于３７℃过夜。 杨梅素购自南京泽朗医药科技有限公司，纯度＞ ９９％，二甲亚砜（ＤＭＳＯ）助溶，１６４０培养基稀释至 所需浓度（ＤＭＳＯ的终浓度＜０．３％），抽滤除菌。 １６４０培养基、胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ公司）；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小 室（Ｃｏｍｉｎｇ公司）；胰酶、十二烷基磺酸钠一聚丙烯 酰胺（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）凝胶配制试剂盒（碧云天生物技术 研究所）。 兔抗人ＭＭＰ．２、ＭＭＰ－９多克隆抗体（北京博奥 森生物有限公司）；鼠尾胶原蛋白（杭州生友生物技 术公司）；Ｍａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ公司）。 ２方法 ２．１ ＭＴＦ法检测杨梅素对ＥＡ．ｈｙ９２６细胞增殖的影响 取对数生长期的细胞，胰酶消化后细胞计数， 接种于９６孔板，每孔加２００ ｔｚＬ细胞悬液（含３×１０ 个细胞），常规培养过夜，至细胞贴壁，换上梯度浓 度分别为０．０１、０．１、１ ｍｍｏｌ・Ｌ 的含药培养基，并 设空白对照组。每个剂量设６个平行复孔，常规培养 ２４ ｈ后，吸弃培养基，每孔加质量浓度为５ ｍｇ・ｍＬ 的Ｍｒｒｒ溶液２０ ，继续培养４ ｈ，吸弃上清后每孔 加ＤＭＳＯ ２００ Ｌ，振荡器振荡１０ ｍｉｎ后，酶标仪 （美国ＢＩＯ－ＴＥＫ公司）测定４９０ ｎｍ的吸光度，重复３ 次。 ２．２ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室侵袭实验 将细胞消化后用０．１％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）重 悬，细胞（１ ｘ １０。）以每孔１００ ｌｘＬ种入ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小 室，加药刺激，小室外部空间加入６００ Ｌ含１０％小 牛血清的完全培养基作为化学趋化剂。置５％ＣＯ 培 养箱，３７ ｏ【＝培养６ ｈ。取出ｔｒａｎｓｗｅｌｌ，用棉签小心将 小室膜上表面细胞去除，取下膜，自然风干。甲醇 固定５ ｍｉｎ，用ＨＥ染色法进行染色，苏木素染色 １０ ｍｉｎ，分色剂中浸泡数秒，再投入伊红染色２ ｒａｉｎ， 分别用５０％、７０％、８０％、９５％、１００％乙醇脱水数 秒，二甲苯透明，中性树脂封片。下表面细胞经染 色后，显微镜下观察、照相，随机取５个视野计数， 计算迁移率。 将细胞消化，重悬，调整细胞浓度为２×１０ ，每孔 １００ Ｌ种于凝胶上，含终浓度分别为０．０１、０．１、 １ ｍｍｏｌ・Ｌ 的药物。孵育１２ ｈ，观察小管形成情况。 ２．４明胶酶谱法检测杨梅素对血管内皮细胞分泌 ＭＭＰ２、ＭＭＰ９的影响 取对数生长期的细胞，以２×１０ 个／孔的密度接 种于２４孔培养板中，培养２４ ｈ，加入含不同浓度杨 梅素的无血清培养液３００ ，继续培养２４ ｈ。收集药 物作用后细胞的无血清培养液，以１２ ０００ ｒｐｍ离心 ５ ｍｉｎ，除细胞碎片，收集上清，立即使用或 一７Ｏ℃保存。ＢＣＡ法进行蛋白浓度测定，根据蛋白 浓度分别取相应的上清，与等量的上样缓冲液混合， 进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ凝胶电泳。制备１０％分离胶和５％浓 缩胶，分离胶中加入终浓度为０．３２ ｎａｇ・ｍＬ 的明胶， 以８０ Ｖ电泳至溴酚蓝前沿进入分离胶，加压至１１０ Ｖ， 继续电泳至溴酚蓝前沿至凝胶前端约１ ｃｍ，停止电 泳、剥胶，用蒸馏水漂洗数次后，移入ｉ００ ｍＬ ２．５％ ＴｒｉｔｏｎＸ一１００溶液中，在摇床上低速摇动， 以洗脱 ＳＤＳ。０．５ ｈ后，用蒸馏水漂洗，换新的ＴｒｉｔｏｎＸ一１００ 溶液，继续洗脱０．５～ｌ ｈ。用蒸馏水漂洗后，加 １００ ｍＬ明胶酶缓冲液，在３７℃恒温温育４２ ｈ。 凝胶用蒸馏水漂洗后，放人染色液（０．０５％考马 斯亮兰Ｒ－２５０，以甲醇一水一冰醋酸＝４５：４５：１０溶 解）中，染色４ ｈ，漂洗后，在脱色液（甲醇．水一冰 醋酸＝４５：４５：１０）中脱色１～２ ｈ，至对照出现清晰 的负染酶带，在凝胶成像仪中照相，观察条带 变化。 ２．ｓ统计学方法 采用ＳＰＳＳ１３．０软件进行单因素的方差分析，数 据均用（ －４－ｓ）表示，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ３结果 ３．１杨梅素对ＥＡ．ｈｙ９２６细胞增殖的影响 ＭＴｒ法观察不同浓度的杨梅素对ＥＡ．ｈｙ９２６血 ・４４１・ ２０１５年５』ｊ笫ｌ７卷第５期 中国现代中药Ｍｏｄｅｍ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 符１人】皮细胞增殖的影响，结果显示，与对照组相比， ３．３杨梅素对血管内皮细胞管腔形成的影响 杨梅素浓度为０的阴性对照组和０．０１ ｍｍｏ］・Ｌ 的处理组在１２ ｈ时均已出现微管样结构，并随着时 间延长逐渐显著；而浓度为０．１、０．０１ ｍｍｏｌ・Ｌ 处 理组典型的微管样结构明显减少。见图３。 浓度分别为０．Ｏｌ、０．１、ｌ ｍｍｏｌ・Ｌ 的杨梅素作用细 胞２４ ｈ看，对ＥＡ．ｈｙ９２６细胞的增殖均有抑制作用， 『ｌｌ以ｌ ｍｍｏｌ・Ｌ 的药物抑制最为显著（Ｐ＜ ０．０１），见 １。 Ｉ２Ｏ １Ｏ０ ８０ ６０ ４０ ２０ 图Ｉ 不同浓度杨梅素对ＥＡ．ｈｙ９２６细胞生长的 抑制率（， ＝６） 一一 ｝Ｉ Ｉ Ｉ － 一一 Ｃｏｎｔｒｏｌ ０．０ｌ ０．１ ｌ 杨梅索（ｍｍｏｌ・Ｌ １） ：Ｉ—ｊ埘Ｊ！Ｈ组卡Ｈ比 Ｐ＜０．０１。 图３不同浓度杨梅素对ＥＡ．ｈｙ９２６细胞微管形成的影响 ３．２ ｔｒａｔ Ｄｓｗｅｌｌ实验检测杨梅素对ＥＡ．ｈｙ９２６细胞侵袭 能力的影响 ３．４明胶酶谱实验 明胶酶谱法检测结果显示，在杨梅素处理细胞 ２４ ｈ后，其高剂量组（１ ｍｍｏｌ・Ｌ ）对ＭＭＰ．２和 ＭＭＰ－９的酶解条带都有显著抑制作用，尤其是对 ＭＭＰ－９的抑制作用更显著。见图４。 杨梅素（ｍｍｏｌ・Ｌ ）Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｏ ０１ ＭＭＰ一２ ＭＭＰ一９ ［１＇ａｌＩｓｗｅｌｌ小窄实验检测杨梅素对ＥＡ．ｈｙ９２６细胞 他袋能ｌ力的改变，结果发现，杨梅素处理后， ＥＡ．ｈｖ９２６细胞的侵袭能力下降，且呈剂量依赖性。 ．浓度分别为０、０．０１、０．１、１ ｍｍｏｌ・Ｌ 的杨梅素处 各绀迁移过膜的细胞数分别为（１７１±１３．４）、 （７６．８±９．１９）、（４７．２±２．９）、（３４．４±５．５），各浓 度纠【 ｊ阴性刈‘照组间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）， ｒ｛ｌ ｌ Ｉｌｌ／ｎＯ］・Ｌ 处理组与阴性对照组之间差异极具 统 意义（Ｐ＜０．０１）。见图２。 ０．１ １ 图４ 明胶酶谱法检测不同浓度的杨梅素对ＥＡ．ｈｙ９２６ 细胞ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９表达的影响 ４讨论 当肿瘤的生长超过一定体积后，必须有新的血 管为其提供氧气和营养，并带走代谢产物，否则肿 瘤的生长将处于休眠状态。肿瘤血管生成是指肿瘤 细胞诱发的毛细血管新生以及肿瘤中微循环网的形 成，为实体瘤的后续生长提供物质基础。基于此理 论，抗血管生成的治疗策略成为肿瘤治疗的热点方 向之一。 肿瘤新生血管的生成过程及机制十分复杂， 其基本过程包括内皮细胞被肿瘤细胞及其支持细胞 分泌的趋化因子募集至肿瘤部位后，在各种生长因 ：Ａ¨Ｃ０ ｒＩｔｌ『ｌｌ；ｌ｛＿０．０１ ＩＩＩＩ１ｌｏｌ・Ｌ－。； 子的作用下大量增殖并相互黏附，重排组成血管。 在此过程中，内皮细胞的迁移能力、到达新生部位 （下转第４６５页） Ｃ．０．Ｉ ＩＩ１Ⅲ（，Ｉ．Ｉ ～：Ｉ）．１ ｍｍｏ］・Ｉ．～。下同 图２杨梅素对细胞迁移实验的影响 ・４４２・ ２０１５年５月第１７卷第５期 中国现代中药Ｍｏｄｅｍ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３结论与讨论 凉山州比较适宜益母草的生长，这可能与凉山日照充 足，昼夜温差大，有利于有效物质积累有关。同时， 该地栽培益母草的有效成分含量和药材产量也最高， 且相对稳定。综上所述，四川省凉山州是益母草的适 宜栽培区，可考虑在此建立益母草规范化种植基地和 益母草中药成方制剂原料基地。 参考文献 ３．１近年来，关于益母草盐酸水苏碱含量的分析较 多，据报道，产自我国各省的益母草，其含量从 ０．０１％～２．１４％之间有报道，以我国北方的益母草含 量较高，最高为２．１４％ 。然而，该ｌ８批川产益 母草样品盐酸水苏碱和盐酸益母草碱的含量均超过药 典规定，平均含量分别为１．３４％和０．１９９％，最高者 可达２．３１％和０．４５４％，是药典规定的４．６和９．１倍。 ［１］ 国家药典委员会．中国人民共和国药典：一部［ｓ］．北 样品送四川省食品药品检验所检测，各项指标均符合 京：中国医药科技出版社，２０１０：２７２—２７３． ［２］ 范芙华，王健鑫，，等．益母草的研究进展［Ｊ］．中国 药典规定，表明四川的益母草质量较优。 药物与临床，２００６，６（７）：５２８—５３０． ３．２ １８批样品中，野生益母草盐酸水苏碱和盐酸 ［３］ 顾月丽，顾江红，等．益母草药理作用的研究［Ｊ］．中国中 益母草碱的含量分别为０．９５％和０．１１５％，而栽培 医药科技，２００８，１５（４）：３２０—３２１． 益母草则为１．７３％和０．２８３％，远高于野生益母草， ［４］徐冰，社守颖，翟永松，等．ＨＰＬＣ法测定不同产地益母草 为将栽培益母草用作中药成方制剂的原料提供了理 中盐酸水苏碱的含量［Ｊ］．中国药品标准，２０１１，１２（４）： 论基础。 ２６４－２６８． ３．３ 益母草是临床常用大宗中药材，广泛用于治疗 ［５］ 南小航，宋婷，彭菲，等．不同产地益母草饮片中盐酸水 妇科疾病，其中药成方制剂益母草注射液用于妇女助 苏碱含量差异分析［Ｊ］．湖南中医药大学学报，２０１２，３２ 产，益母草药材的安全性和有效性不容忽视。而市场 （１）：４０４２． 上的益母草多为野生品，药材质量不稳定，因此，应 ［６］ 可燕，车生泉，等。不同产地益母草总生物碱含量的比较 ［Ｊ］．中草药，１９９９，３０（４）：２７０－２７１． 规范化种植益母草，从源头抓起，为市场提供质量稳 ［７］ 张燕，王文全，魏菊，等．我国北方不同地区益母草不同 定、均一、可控的的药材。本文首次对四川不同地区 部位水苏碱含量的比较［Ｊ］．时珍国医国药，２００７，１８ 所产益母草进行分析，结果显示四川省凉山州野生益 （７）：１５７４－１５７５． 母草的有效成分含量较高，盐酸水苏碱含量最高可达 ［８］ 李敏，卫莹芳．中药材ＧＡＰ与栽培学［Ｍ］．北京：中国中 １．４４％，甚至高于部分地区的栽培药材，说明四Ｊ ｒＩ省 医药出版社。２００６：８４—９１． （收稿日期２０１４．１１—１３） （上接第４４２页） 综上所述，杨梅素在较高的剂量下能通过抑制细 后的增殖能力及血管形成能力是有关肿瘤新生血管 胞的增殖、侵袭迁移及微管形成起到抗肿瘤新生血管 形成的几个重要因素 。 形成的作用。 本研究选择ＥＡ．ｈｙ９２６血管内皮细胞作为研究对 象，通过观察杨梅素对其增殖能力、侵袭迁移能力及 参考文献 血管形成能力的影响，评价杨梅素对肿瘤新生血管形 ［１］ 林国钡，谢燕，李国文．杨梅素的研究进展［Ｊ］．国际药学 成的抑制作用。研究结果表明，杨梅素在高剂量下， 研究杂志，２０１２，３９（６）：４８３－４８７． 即１ ｍｍｏｌ・Ｌ 的剂量下对ＥＡ．ｈｙ９２６血管内皮细胞 ［２］ 代雄，颜杰宽，甘秀海．黄酮类化合物研究进展［Ｊ］．贵州 师范学院学报，２０１３，２９（９）：３０２—３０６． 的增殖、侵袭迁移及微管生成具有显著的抑制作用。 ［３］Ｄｅｅｂａ Ｎ Ｓ，Ｖａｑａｒ Ｍ Ａ，Ｍｏｈａｍｍａｄ Ｉ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ 另外，在内皮细胞降解并穿透血管与肿瘤间基 ｏｆＡｋｔ／ｍＴＯＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｔｈｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｆｉｓｅｔｉｎ［Ｊ］． 质，到达肿瘤部位的过程中，基质金属蛋白酶 Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２０１３，１３（７）：９９５—１００１． （Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｅｐｔｉｄａｓｅｓ，ＭＭＰｓ）降解细胞外基质 ［４］ 陈信义，徐力，张燕明，等．恶性肿瘤新生血管研究进展 是重要的一环。明胶酶谱实验检测结果表明，高 ［Ｊ］．癌症进展杂志，２００５，３（６）：５２８—５３３． 剂量（１ ｍｍｏｌ・Ｌ ）的杨梅素对ＭＭＰ－９和ＭＭＰ一２的 ［５］ 赵黎明，徐寒梅，奚涛．肿瘤血管生成及其抑制剂研究进 蛋白水平均有显著的抑制作用。 展［Ｊ］．药物生物技术，２０１０，１７（５）：４５７－４６１． （收稿日期２０１５－０２－２８） ・４６５・
