医药论坛杂志２０１５年５月第３６卷第６期Ｊ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｏ１．３６ Ｎｏ．６ Ｊｕｎｅ ２０１５ ・１・ ・论 著・ 精液处理前后精子ＤＮＡ碎片的变化及 对ＩＶＦ—ＥＴ结局的影响 查钱江，高勇，王雅丽，徐艳文，周产权，刘雅峰 中山大学附属第一医院生殖医学中心，广州５１００８０ 摘要：目的 探讨经密度梯度离心结合上游法处理前后精子ＤＮＡ碎片率的变化以及对体外授精一胚胎移植（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ—Ｅｍｂｒｙｏ Ｔｒａｎｓｆｅｒ，ＩＶＦ—ＥＴ）结局的影响。方法 收集１０７例行ＩＶＦ助孕患者的精液，按照 ＷＨＯ标准对处理前精液行精液常规分析，采用精子染色质扩散试验（ＳｐｅｒｍＣｈｒｏｍａｔｉｎ Ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ，ＳＣＤ）检测处理 前和处理后精液的精子ＤＮＡ碎片率，并收集ＩＶＦ实验室及临床结局。根据处理前精子ＤＮＡ碎片率将患者分为 两组：精子ＤＮＡ碎片率≤２Ｏ％的患者为Ａ组，精子ＤＮＡ碎片率＜２０％的患者为Ｂ组。结果处理后精子ＤＮＡ 碎片率显著低于处理前精子ＤＮＡ碎片率［（３．４９±３．３８）％ｖｓ（１８．６９±１０．８９）％，Ｐ＜０．００１）］；处理前和处理 后精子ＤＮＡ碎片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有显著负相关关系（Ｓｐｅａｒｍａｎ相关系数：一０．５０８、 一０．６２９、一０．２８３、一０．２９９、一０．３９９、一０．３２９，Ｐ＜０．０５）与男方年龄、精液量、精子密度、正常形态率及卵裂率无 显著相关关系；Ｂ组处理后精子ＤＮＡ碎片率高于Ａ组，差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；Ｂ组的精子总活动率、前 向运动率和受精率均低于Ａ组，差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；两组男方年龄、女方年龄、不孕年限、获卵数、精 液量、精子密度、正常形态率、卵裂率、种植率和妊娠率之间的差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论升高会降低受精率，但对种植率、妊娠率等临床结局没有显著影响。 关键词：精子ＤＮＡ碎片；精子染色质扩散实验；体外授精 中图分类号：Ｒ６９８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２－３４２２（２０１５）０６－Ｏ００１－０５ 密度梯 度离心加上游法处理精液后可以显著降低精子ＤＮＡ碎片率，精子ＤＮＡ碎片率与精子活力最密切相关，碎片率 Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｉｔ’ｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆⅣＦ—ＥＴ ＺＨＡ Ｑｉｎ—ｊａｉａｎｇ，ＧＡＯ Ｙｏｎｇ，ＷＡＮＧ Ｙａ—ｌｉ，ＸＵ Ｙａｎ—ｗｅｎ，ＺＨＯＵ Ｃｈａｎ—ｑｕａｎ，ＬＩＵ Ｙａ—ｆｅｎｇ Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５ １００８０，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ（ＤＦＩ）ｂｅｆｏｒｅ ｎｄ ａａｆｔｅｒ ｄｅｎｓｉｔｙ ｇｒａ－ ｄｉｅｎｔ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ（ＤＣＧ）ａｎｄ ｓｗｉｍ—ｕｐ ｉｎ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ—Ｅｍｂｒｙｏ Ｔｒａｎｓｆｅｒ（ＩＶＦ—ＥＴ），ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｐｅｒｍ ＤＦＩ ｏｎ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ ＩＶＦ—ＥＴ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １０７ ＩＶＦ—ＥＴ ｐａｔｉｅｎｔｓ’ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｎｄ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ｔａｈｒｏｕｇｈ ＤＣＧ ａｎｄ ｓｗｉｍ—ｕｐ．Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｓｅｍｅｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｄｏｎｅ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ＷＨＯ ｓｔａｎｄａｒｄ ｂｅｆｏｒｅ ｐｒｏ－ ｃｅｓｓｅｄ．Ｓｐｅｒｍ ＤＦ１ ｗａｓ ｎａａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｓｐｅｒｍ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ（ＳＣＤ）ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ ＩＶＦ— ＥＴ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ｕｐｏｎ ｔｈｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ＤＦＩ ｂｅｆｏｒｅ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ：Ｇｒｏｕｐ Ａ（ＤＦＩ≤ ２０％），Ｇｒｏｕｐ Ｂ（ＤＦＩ＞２０％）．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｓｐｅｒｍ ＤＦＩ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ａｆｔｅｒ ＤＧＣ ａｎｄ ｓｗｉｍ—ｕｐ（３．４９％± ３．３８％ｖｓ １８．６９％４－１０．８９％，Ｐ＜０．００１）．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｄｙ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｐｅｒｍ ＤＦＩ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ｆａｔｅｒ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｐｅｒｍ ｖｉｔｌａｉｔｙ／ｓｐｅｍ ｐｒｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｍｏｔｉｌｉｔｙ／ｆｅｔｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ（Ｓｐｅａｒｍａｎ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｉｃｉｆｅｎｔ：一 ０．５０８、一０．６２９、一０．２８３、一０．２９９、一０．３９９、一０．３２９，Ｐ＜０．０５），ｂｕｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍａｌｅ ａｇｅ／ｓｅｍｅｎ ｖｏｌｕｍｅ，ｄｅｎｓｉｔｙ，ｎｏｒｍａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ／ｃｌｅａｖａｇｅ ｒａｔｅ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｏｕｐ Ａ。ｓｐｅｒｍ ｖｉｔｌｉｔａｙ ａｎｄ ｓｐｅｒｍ ｐｒｏ－ ｇｒｅｓｓｉｖｅ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｆｅｔｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗｅｒｅ ｒｅｄｕｃｅｄ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｂ（Ｐ＜０．０５）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｒｏｕｐｓ ｏｆｇ ｍａｌｅ ａｇｅ／ｆｅｍａｌｅ ａｇｅ／ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ａｇｅ／ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ ｏｏｃｙｔｅｓ／ｓｅｍｅｎ ｖｏｌｕｍｅ，ｄｅｎｓｉｔｙ，ｎｏｒｍａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ／ ｃｌｅａｖａｇｅ ｒａｔｅ／ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｒａｔｅ／ｐｒｅｎａｎｃｙ ｒｇａｔｅ ｈａｄ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｌａ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＤＧＣ ａｎｄ ｓｗｉｍ—ｕｐ ｃａｎ ｒｅｄｕｃｅ ｓｐｅｒｍ ＤＦＩ ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ．Ｓｐｅｒｍ 基金项目：广东省科技计划项目（２０１０Ｂ０３１６０００８１） 通信作者：刘雅峰，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｕｙａｆｅｎｇｌ１ｌ＠ｙｅａｈ．ｎｅｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｉｓ ｍｏｓｔ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｓｐｅｒｍ ＤＦＩ．Ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｓｐｅｒｍ ＤＦ１ ｗｉｌｌ ｌｏｗｅｒ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｂｕｔ ｆｏｒ ｉｍｐｌｎｔａｔａｉｏｎ ・２・ 医药论坛杂志２０１５年５月第３６卷第６期Ｊ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｄ．３６ Ｎｏ．６ Ｊｕｎｅ ２０１５ ｒａｔｅ ａｎｄ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｒａｔｅ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｆｆｅｃｔｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ；Ｓｐｅｒｍ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ；Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ 男性不育的病因是多因素的，但研究进展较 慢。目前男性不育的主要诊断指标还是精液常规 参数 Ｊ。随着实验室技术的迅速发展，虽然精液 常规分析的准确性有所提升 Ｊ，但其诊断的局限 机，以色列Ｓｅｆｉ公司Ｍａｒｋｌｅｒ精子计数板，深圳市博 锐德生物科技有限公司的精子ＤＮＡ碎片检测试剂 盒和Ｄｉｆ—Ｑｕｉｋ染色液，广州化学试剂厂的无水乙 醇，瑞典Ｖｉｔｒｏｌｉｆｅ公司的ＳｐｅｒｍＧｒａｄ液和Ｓｐｅｒ— ｍＲｉｎｓｅ液，荷兰Ｌｅｊａ公司的一次性精子计数板。 １．３研究方法 性还是存在的。据有关文献报道统计，在精液常 规参数正常的男性人群中，大约有１５％的男性是 不育的 －５］。在临床上分析妊娠结局时我们发现 有生育力的男性和不能生育男性的精液常规参数 是有重叠的 Ｊ。这可能就是为什么仅仅是精液常 规检查还不能完全揭示男性不育的机制。所以精 １．３．１精液标本的采集和处理精液标本均在禁 欲３～７ ｄ后于女方取卵手术当天手淫法留取，置 于室温环境下液化，记录精液体积，留取小部分液 化后精液以做精液常规及ＤＮＡ碎片率的检测，剩 液常规分析已经不足以作为评价男性生育能力的 最佳指标，很明显我们急需更多更深人的实验室 指标，结合精液常规参数，希望可以更全面、更客 余大部分液化后精液采用密度梯度离心法加上游 法处理，待处理后精液用于ＩＶＦ加精，取少量剩余 的处理后精液用于精子ＤＮＡ碎片率的检测。 观，更准确的评估男性的生育能力。精子ＤＮＡ检 测已经被认为是非常有前景的检测指标 Ｊ，有研 究数据表示，精子ＤＮＡ损伤的影响可以存在于生 育的不同阶段，可能与受精率、胚胎发育、种植率、 妊娠率、流产率以及后代的先天性异常等有 关 。但研究结果存在争议，精子ＤＮＡ损伤的 １．３．２精液常规分析将一次性精子计数板放在 ３７℃恒温载物台预热，用加样器将１０ｐＪ左右的处 理前精液加入一次性精子计数板，用计算机辅助 精子分析仪（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ—ａｉｄｅｄ ｓｐｅｒｍ ａｎａｌｙｓｉｓ，ＣＡ— ＳＡ）分析精子的密度、活率和活力。用Ｄｉｆ—Ｑｕｉｋ 快速染色法染色精子后用ＣＡＳＡ分析精子形态。 意义有待进一步研究。 １材料和方法 １．３．３精子ＤＮＡ碎片率的检测应用ＳＣＤ法检 测精子ＤＮＡ碎片，依照试剂盒说明按如下步骤操 作：①将易熔凝胶管置于８０ｃＩ＝水浴箱孵育２０ｍｉｎ。 ②调整精子密度（处理前和处理后的精子），使其 在（１～５）×１０。／ｍｌ左右，取精液标本３０ｂｄ，加入已 熔化的易熔凝胶管③将载玻片置于２～８￣Ｃ冰箱预 冷５ｍｉｎ后取出，迅速于载玻片包被区域加入步骤 １．１ 研究对象和分组 选取２０１４年６月至 ２０１５年２月期间在中山大学附属第一医院生殖中 心就诊符合纳入标准的患者为研究对象。纳入标 准：女方为单纯双侧输卵管阻塞性因素不孕，且不 合并其它女性不孕因素，年龄＜３６岁， ＢＭＩ＜２５ｋｇ／ｍ ，助孕次数≤２次，月经第２～５天测 基础内分泌值正常，无卵巢手术史、放化疗史及遗 ②制备的精子悬液３０１ｘｌ，迅速盖上盖玻片后置于２ ～８℃冰箱中５ｍｉｎ后取出，小心移去盖玻片。④将 载玻片立即垂直浸入盛有反应液Ａ的反应池内， 传病家族史，获卵４枚，男方无外伤及遗传病家族 史，无性功能障碍，体检未发现有明显睾丸、附睾 及输精管异常，行常规长效降调节方案ＩＶＦ，禁欲３ ～准确反应７ｍｉｎ。⑤取出载玻片，将载玻片垂直浸 入盛有反应液Ｂ的反应池，准确反应２５ｍｉｎ。⑥取 出载玻片，水平放人大量纯化水中５ｍｉｎ，其间换水 ７天，新鲜的精液标本。排除标准：处理后精液 １—２次。⑦将载玻片依次放入７０％、９０％、１００％ 乙醇中各２ｍｉｎ进行脱水，空气中自然干燥。⑧染 片。每张载玻片以瑞士染液１—２ｍｌ覆盖，再缓慢 质量差而改行ＩＣＳＩ助孕的患者。根据处理前ＤＮＡ 碎片率将研究对象分成两组：Ａ组精子ＤＮＡ碎片 率≤２０％，Ｂ组精子ＤＮＡ碎片率＞２０％。本研究 经中山大学附属第一医院伦理委员会批准通过， 患者均签署知情同意书。 地加入瑞士缓冲液２—３ｍｌ，染色７ｒａｉｎ后以流水轻 轻冲洗染片，空气中自然干燥。⑨用显微镜在油 镜下观察至少５００个精子，计数存在ＤＮＡ碎片的 １．２仪器与试剂 德国Ｌｅｉｃａ公司光学显微镜， 美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司Ｍｉｌｌｉ—Ｑ Ｉｎｔｅｇｒａｌ水纯化仪，西 班牙Ｍｉｃｒｏｐｔｉｃ公司计算机辅助精子分析仪，上海 一精子数量。结果判断根据Ｆｅｍａｎｄｅｚ标准：①大光 晕，单侧光晕厚度大于精子头部最小直径；②中光 晕，介于大光晕和小光晕之间；③小光晕，单侧光 晕厚度小于精子头部最小直径的１／３；④无光晕。 恒公司恒温水浴箱，德国Ｓｉｇｍａ公司台式离心 医药论坛杂志２０１５年５月第３６卷第６期Ｊ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｏ１．３６ Ｎｏ．６ Ｊｕｎｅ ２０１５ ・３・ 大光晕和中光晕精子为ＤＮＡ完整的精子，小光晕 和无光晕精子为存在ＤＮＡ碎片的精子。精子 ＤＮＡ碎片率（％）＝存在ＤＮＡ碎片的精子数被观 察的精子总数１００％。 １．３．４实验室及临床结局的收集取卵当日按实 验室常规方法向盛有卵子的培养皿中加入处理后 的精液，１６～１８ｈ后观察受精情况，见到２个原核 （２ＰＮ）的受精卵为正常受精，见到３ＰＮ或１ＰＮ为 异常受精。本研究受精率＝２ＰＮ受精数获卵总数 １００％。授精后第三天观察胚胎发育情况并进行胚 胎移植。卵裂率＝受精卵裂胚胎数受精卵数 １００％。胚胎移植后１４ｄ测定血清１３一ｈＣＧ值确定 是否生化妊娠，２８ｄ后行阴道Ｂ超检查见宫内妊娠 囊和胎心搏动确定为临床妊娠。种植率＝着床胚 胎数移植胚胎数１００％，临床妊娠率＝临床妊娠周 期数所有移植周期数１００％。 １．４ 统计学分析 所有统计学计算均采用 ＳＰＳＳ２０．０统计软件进行，Ｐ＜０．０５表示差异有统 计学意义。计量资料经检验符合正态分布则采用 ｔ检验或ｔ’检验，数据描述采用均数标准差（元±ｓ） 表示；处理前后精子ＤＮＡ碎片率的比较采用配对ｔ 检验；不服从正态分布的资料采用Ｗｉｌｃｏｘｏｎ秩和 检验，数据描述采用Ｍ（Ｐ２５，Ｐ７５）表示；种植率、妊 娠率采用四格表卡方检验；相关关系采用 Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相关分析。 ２ 结 果 ２．１一般资料共计１０７例患者人组，因各种临 床因素取消胚胎移植２１例，２例改行ＩＣＳＩ助孕，１ 例改行Ｈａｌｆ—ＣＩＳＩ助孕，最终８３例患者纳入研究。 男方年龄２４～４２岁，平均（３１．３ ４－４．１）岁，女方年 龄２３—３６岁，平均（２９．０±３．０）岁，不孕年限１— １１年，平均（３．４ ４－２．３）年。 ２．２ 密度梯度离心加上游法处理前后精子ＤＮＡ 碎片率的变化及与男方年龄、精液常规参数、受精 率、卵裂率的相关性处理前精子ＤＮＡ碎片率为 （１８．６９±１０．８９）％，处理后精子ＤＮＡ碎片率为 （３．４９±３．３８）％。处理后精子ＤＮＡ碎片率显著 低于处理前精子ＤＮＡ碎片率，差异有统计学意义 （Ｐ＜０．００１），且处理前和处理后精子ＤＮＡ碎片率 之间有正相关关系（Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相关系数ｒ＝ ０．６０６，Ｐ＜０．００１）。处理前和处理后精子ＤＮＡ碎 片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有 显著负相关关系，与男方年龄、精液量、精子密度、 正常形态率及卵裂率无显著相关关系，具体相关 系数见表１。 表１ 处理前后精子ＤＮＡ碎片率与男方年龄、精液 常规参数、受精率、卵裂率的相关性 ２．３ 两组患者一般资料的比较共计８３例患者 纳入研究，精子ＤＮＡ碎片率≤２０％的Ａ 组患者５１ 例，精子ＤＮＡ碎片率＞２０％Ｂ组患者３２例。两组 患者的男方年龄、女方年龄、不孕年限及获卵数的 差别均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；Ｂ组处理后精子 ＤＮＡ碎片率高于Ａ组，差别有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５），见表２。 表２ Ａ、Ｂ两组一般资料的比较 注：与Ａ组比较，ａｐ＜Ｏ．０５。 ２．４ 两组患者精液常规参数的比较Ｂ组的精子 总活动率和前向运动率均低于Ａ组，差别有统计 学意义（Ｐ＜０．０５）；两组的精液量、精子密度和正 常形态率之问的差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见 表３。 表３ Ａ、Ｂ两组精液常规参数的比较 驯 黻总 率前 率正 率 ０６／ｍｌ Ａ组５１ ２．６±１．１ ６１．５±３４．０ ６０．４±１２．５ ３９．３±１５．２ ４．５（３．５，６．０） Ｂ组３２ ２．５±０．８ ６８．３±３４．８ ４８．０±１３．５ ａ ２２．４±９．８ａ ４．２（３．０，５．８） 注：与Ａ组比较ａｐ＜Ｏ．０５。 ２．５ 两组患者ＩＶＦ结局的比较Ｂ组受精率低于 Ａ组，差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；两组的卵裂 率、种植率和妊娠率之间的差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），见表４。 ・４・ 医药论坛杂志２０１５年５月第３６卷第６期Ｊ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｏ１３６ Ｎ０．６ Ｊｕｎｅ ２０１５ ．表４ Ａ、Ｂ两组ＩＶＦ结局的比较（％） 组别鑫 受精率 卵裂率 种植率 临床妊娠率 Ａ组５ｌ ７７．９３±１３．７２ ９７．３±５５．３３ ４７．１７（５０／１０６）６８．６３（３５／５１） Ｂ组３２ ６７．１７±１７．８３ａ ９４．３４±１４．７６ ４２．４２（２８／６６） ５９．３８（１９／３２） 注：与Ａ组比较，ａｐ＜０．０５。 ３讨论 近年来，许多研究试图研究精子ＤＮＡ碎片率 与精液常规参数之间可能存在的关系，得出了一 些模棱两可的结论 Ｊ，大部分研究报道精子ＤＮＡ 碎片率与年龄及精液常规参数之间呈负相关关 系 。与之比较，有些研究报道未能发现精液 常规参数与精子ＤＮＡ碎片率之间有相关关 系 。本研究显示密度梯度离心加上游法处理 前和处理后精子ＤＮＡ碎片率均与精子总活动率和 前向运动率有显著负相关关系，且以处理前精子 ＤＮＡ碎片率≤２０％和＞２０％分为Ａ、Ｂ两组，Ａ组 的精子总活动率和前向运动率均高于Ｂ组，这与 Ｓｔｅｐｈａｎｉｅ Ｂｅｌｌｏｃ等的研究一致，其研究报道称精子 ＤＮＡ碎片率与精子活力是最密切相关的＿ｌ 。但 没有得出精子ＤＮＡ碎片率与男方年龄呈正相关关 系的结果，这可能与本研究的样本量小及人组男 性年龄偏小有关。一般男性年龄大于４５岁才会有 精子ＤＮＡ碎片率的明显升高¨ ，而本研究男性的 年龄范围为２４—４２岁，平均（３１．３±４．１）岁。 关于精子ＤＮＡ碎片对受精率的影响确实存在 争议。有研究发现高水平的精子ＤＮＡ碎片与受精 率之间有负相关关系 ，这与本研究结果一致。 很多研究表明精子ＤＮＡ损伤严重的男性让女性自 然妊娠所需时间更长 ，这可能就是因为精子 ＤＮＡ碎片率升高降低了精子的授精能力。然而， 如果精子ＤＮＡ损伤的类型和程度可以被卵子的修 复能力平衡，那么即使精子ＤＮＡ碎片率增加仍然 有受精的可能＿４ ’ 卜埔ｊ。这在辅助生殖过程中尤 其明显，特别是ＩＣＳＩ的受精率似乎与精子ＤＮＡ损 伤或ＤＮＡ异常凝聚没有相关性 。不管是自然 妊娠率还是通过ＡＲＴ的妊娠率，有研究报道其与 精子高水平的ＤＮＡ碎片率之间有负相关关 系［５，１９１。虽然这种相关关系不总是有统计学意义， 但很多研究表明精子ＤＮＡ碎片增加是妊娠成功和 维持的有害因素Ⅲｊ。尽管本研究Ａ组６８．６３％的 妊娠率比Ｂ组５９．３８％的妊娠率高出不少，但两组 妊娠率的差异没有统计学意义，这主要可能是本 研究样本量不足的原因。尽管精子ＤＮＡ碎片率在 预测妊娠率方面还有争论，但它的预测价值在自 然妊娠和子宫内人工授精（ｉｎｔｒａｕｔｅｒｉｎｅｉｎｓｅｍｉｎａ— ｔｉｏｎ，ＩＵＤ周期中更高 ］。这可能是因为在ＩＶＦ中 精子通过密度梯度离心加上游法处理后精子ＤＮＡ 碎片率大为减少，使其对妊娠率的影响减弱。虽 然ＩＵＩ周期中精子也经过处理，但一般只是经过密 度梯度离心法处理而没有经过上游法处理，而精 子ＤＮＡ碎片率与精子活力最密切相关，有显著的 负相关关系，所以上游法最能减少有ＤＮＡ损伤的 精子。 综上所述，本研究结果表明使用密度梯度离 心加上游法可以显著降低精子ＤＮＡ碎片率，处理 前和处理后精子ＤＮＡ碎片率均与精子总活动率、 前向运动率及受精率有显著负相关关系。精子 ＤＮＡ碎片率升高会降低受精率，对预测ＩＶＦ受精 率有一定的临床价值。 参考文献 ［１］Ｂａｒｒａｔｔ ＣＬ．Ｓｅｍｅｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｓ ｔｈｅ ｃｏｒｎｅｒｓｔｏｎｅ ｏｆ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｍａｌｅ ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ，２００７，２５１（１６９０）：８－１０，１２， １５’７． ［２］ Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．ＷＨＯ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌｆｏｒ ｔｈｅ Ｅｘ— ａｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ＨｕｍａｎＳｅｍｅｎ，５ｔｈ ｅｄ［Ｍ］．Ｓｗｉｔｚｅｒ－ ｌａｎｄ：ＷＨＯ ｐｒｅｓｓ，２０１０． ［３］Ｓｐａｎｏ Ｍ，Ｓｅｌｉ Ｅ，Ｂｉｚｚａｒｏ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃｎａｃｅ ｏｆ ｓｐｅｒｍ ｎｕｃｌｅａｒ ＤＮＡ ｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ｏｎ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｏｕｔｃｏｍｅ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ＆Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，２００５，１７（３）：２５５－２６０． ［４］Ｌｉｎ ＭＨ，ｋｕｏ—ｋｕａｎｄ Ｌｅｅ Ｒ，Ｌｕ ＣＨ，ｅｔ ａ１．Ｓｐｅｒｍ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｓｓａｙ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ａｒｅ ｎｏｔ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ， ｅｍｂｒｙｏ ｑｕａｌｉｔｙ，ａｎｄ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｒａｔｅｓ ｉｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｅ ｓｐｅｒｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｂｕ ｔｍｉｇｈｔ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｓｐｏｎｔａ— ｎｅｏｕｓ ａｂｏｒｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ［Ｊ］．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２００８，９０（２）：３５２－９． ［５］Ｌｅｗｉｓ ＳＥ，Ａｇｂａｊｅ Ｉ，Ａｌｖａｒｅｚ Ｊ．Ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｔｅｓｔｓ ａｓ ｕｓｅｆｕｌ ａｄ— ｊｕｎｃｔｓ ｔｏ ｓｅｍｅｎ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｓｙｓｔ Ｂｉｏｌ ＲｅｐｒｅｄＭｅｄ，２００８，５４ （３）：１１１－２５． ［６］Ｈｕｓｚａｒ Ｇ，Ｊａｋａｂ Ａ，Ｓａｋｋａｓ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ ＩＣＳＩ ｓｐｅｒｍ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇ：ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓａｐｅｃｔｓ［Ｊ］．Ｒｅｐｒｏｄ Ｂｉｏｍｅｄ Ｏｎｌｉｎｅ，２００７，１４（５）：６５０－６３． ［７］Ａｉｔｋｅｎ ＲＪ，ｄｅ Ｉｕｌｉｉｓ ＧＮ．Ｖａｌｕｅ ｏｆ ＤＮＡ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｆｏｒ－ ｔｉｌｉｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｏｃ Ｒｅｐｒｏｄ Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｕｐｐｌ，２００７，６５：８１－９２． ［８］ Ｋａｒｙｄｉｓ Ｓ，Ａｓｉｍａｋｏｐｏｕｌｏｓ Ｂ，Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ Ｎ，ｅｔ ａ１．ＩＣＳＩ ｏｕｔ－ ｃｏｍｅ ｉｓ ｎｏｔ ａｓｓｃｏｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ ｗｉｔｈ ａｂ— ｎｏｒｍａｌ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎＶｉｖｏ，２００５，１９（５）：９２１・ ５． ［９］Ａｅｈａｒｙｙａ Ｓ，Ｋａｎｊｉｌｌａ Ｓ，Ｂｈａｔｔａｅｈａｒｙｙａ ＡＫ．Ｄｏｅｓ ｈｕｍａｎ ｓｐｅｒｍ ｎｕｃｌｅａｒ ＤＮＡ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ａｆｆｅｃｔ ｅｍｂｒｙｏ ｑｕａｌｉｔｙ？［Ｊ］．Ｉｎｄｉｎａ Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ，２００５，４３（１１）：１０１６—１０２２． ［１Ｏ］Ｙｏｕｎｇｌａｉ ＥＶ，Ｈｏｌｔ Ｄ，Ｂｒｏｗｎ Ｐ，Ｊｕｒｉｓｉｃｏｖａ Ａ，ＣａｓｐｅｒＲＦ． Ｓｐｅｒｍ ｓｗｉｍ—ｕｐ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ，２００１，１６（９）：１９５０－３． （下转第７页） 医药论坛杂志２０１５年５月第３６卷第６期ＪＭｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｏ１．３６ Ｎｏ．６ Ｊｕｎｅ ２０１５ ・７・ 失产生，上门中切牙唇倾，覆盖加大。磨牙远中移 动并向远中倾斜，下颌骨发生顺时针旋转，磨牙远 移有助于打开前牙咬合，ＭｃＮａｍａｒａ认为上颌骨第 二恒磨牙尚未萌出时，下面高轻微增加与远移磨 牙倾斜有关。下面高增加，覆合减小，尽管不明 显，但潜在的磨牙远中倾斜及开合出现，随第二磨 牙萌出，下颌具有开张趋势，提醒高角患者慎用。 临床上可以通过在摆形力臂上附加竖直曲等措施 腭部基托不足以抵抗磨牙远移反作用力，导致上 前牙支抗丧失，提醒前突患者禁用。有研究 腭 部种植体植入作为支抗，矫治器不干扰前牙移动， 但是这仍需进一步固定矫治阶段的研究来证实。 上颌第二磨牙对摆形矫治矫治器矫治效果的 影响存在争议。研究表明：尚未萌出（位于上颌第 磨牙根尖１／３），发现他们上颌第一磨牙远中倾 斜角度较大（４．３。），部分或完全萌出，其第一磨牙 倾斜角度较小（２。），第二磨牙萌出可能需更大的 力来推第一磨牙向远中，相对要丧失更多的前牙 一缓解远移磨牙倾斜度。 研究发现 单独使用摆形矫治（当磨牙远移 动到位后，再装配固定矫治器）上磨牙远移更多 （３．７ ｍｍ对２．６ ＩＴＩ１ＴＩ），但倾斜角度更大（７．３。对 ４．７。）。直丝弓矫治阶段，随着上磨牙支抗部分丧 失，Ｐ１’Ｖ—Ｕ ，ＳＮ—ｕ 与摆形矫治前无差异，提示 支抗。在固定矫治系统中，只要条件合适，第二磨 牙尽早进入矫治系统，使牙齿能更好沿设计方向 移动，本研究结果支持Ｂｕｓｓｉｃｋ，ＭｃＮａｍａｒａ的建 议 Ｊ，最好在第二磨牙萌出前推第一磨牙。 参考文献 ［１］Ｈｉｌｇｅｒｓ ＪＪ．Ｔｈｅ ｐｅｎｄｕｌｕｍ ａｐｐｌｉａｎｃｅ ｆｏｒ ｃｌａｓｓ ＩＩ ｎｏｎ—ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ 在直丝弓矫治开始前需采取保护增强支抗措施来 控制上磨牙近中移动，①摆形矫治阶段过矫治，② 横腭杆加强磨牙支抗，或用口外弓稳定上颌磨牙 位置。Ｊｏｈｎｓｔｏｎ＿３ 研究发现９０％的类错合患者在 ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏａｈｏｄ，１９９２，２６（１１）：７０６－７１４． ［２］段银钟．正畸ｌ临床推磨牙远移技术［Ｍ］．西安：世届图书出版 社，２００５：７１－７２． ［３］ Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＬＥ Ｊｒ．Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｌａｓｓ ＩＩ ｐａｔｉｅｎｔ ｒｅｎｄｅｒｉｎｇ ｕｎｔｏ 固定矫治阶段，下颌生长超过上颌。支抗丧失磨 牙关系由近中变为中性关系，磨牙的尖窝锁结关 系有利于上磨牙位置稳定。 磨牙远中移动过程中，前牙发生了明显的支 Ｃａｅｓａｒ［Ｊ］．Ｓｅｍｉｎ Ｏｒｔｈｏｄ，１９９８，４（１）：５９－６２． ［４］ 潘爽，王春玲，刘东旭，等．摆式矫治器结合直丝弓矫治器治 抗丧失，在随后的固定矫治过程中，上切牙腭向倾 疗ＩＩ类错合的疗效分析［Ｊ］．口腔医学，２０１０，３０（２）：９３－９５． ［５］刘晶，刘月华，李强．改良蛙式矫治器远中移动上颌磨牙临床 斜，但是仍然较治疗前唇倾，但治疗后覆盖正常， 笔者认为是由于下颌潜在的生长及下切牙唇倾， 与潘爽 研究一致。固定矫治后ＯＪ和ＯＢ减小， 初探［Ｊ］．临床口腔医学杂志，２０１３，２９（９）：５６０－５６３． ［６］ Ｂｕｓｓｉｃｋ ＴＪ，ＭｃＮａｍａｒａ ＪＡ Ｔｒ．Ｄｅｎｔｏａｌｖｅｏｌｒ ａｎｄ ｓａｋｅｌｅｔａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｅｎｄｕｌｕｍ ａｐｐｌｉａｎｃｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｏｒｔｈｏｄ Ｄｅｎｔ－ ｏｆａｃ Ｏｒｔｈｏｐ，２０００，１１７（３）：３３３￣４３． 前牙覆合覆盖减小，软组织侧貌变化不明显。前 牙唇倾与矫治器支抗设计有关，摆形矫治矫治器 收稿日期：２０１５－０１－０９修回日期：２０１５－０４－２８责任编辑：邢洪波 以上颌切牙和上腭部作为磨牙远中移动支抗，但 （上接第４页） ［１１］Ｐｅｒｒｉｎ Ａ，Ｃａｅｒ Ｅ，Ｏｌｉｖｅｒ—Ｂｏｎｅｔ Ｍ，ｅｔ ａ１．ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｉｏｔｉｃｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｐｅｒｍ ｏｆ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ ａ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ— ２００６，２１（３）：６８５－９３． ［１６］Ｓｐａｎｏ Ｍ，Ｂｏｎｄｅ ｊＰ，Ｈｊｕ１１ｕｎｄ ＨＩ，ｅｔ ａ１．Ｓｐｅｒｍ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｄａｍ— ａｇｅｉｍｐａｉｒｓ ｈｕｍａｎ ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ．ＴｈｅＤａｎｉｓｈ Ｆｉｒｓｔ Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ Ｐｌａｎｎｅｒ ｓｔｕｃｔｒｕｒａｌ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２００９，９２（２）：５８３－９． ［１２］Ｓ Ｂ，Ｍ Ｂ，Ｍ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｗｈｉｃｈ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｐｅｒｍ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ ｉｓ ｍｏｓｔ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｍｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｆｏｒ ｉｎｆｅｒｔｉｌ－ Ｓｔｕｄｙ Ｔｅａｍ［Ｊ］．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２０００，７３：４３－５０． ［１７］Ｂｅｎｃｈｍｂ Ｍ，Ｌｏｒｎａｇｅ Ｊ，Ｍａｚｏｙｅｒ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｓｐｅｒｍ ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕ－ ｃｌｅｉｃａｃｉｄ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｓ ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｅａｔｏｒｏｆ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒｅｐｒｏ— ｉｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔ— ｉｃｓ，２０１４，３１（５）：５２７－５３２． ｄｕｃｔｉｖｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｕｔｃｏｍｅ［Ｊ］．ＦｅｒｔｉｌＳｔｅｒｉｌ，２００７，８７（１）：９３． １００． ［１３］Ｍｏｓｋｏｖｔｓｅｖ Ｓ Ｉ，Ｗｉｌｌｉｓ Ｊ，Ｂｒｅｎｄａｎ Ｍ．Ａ罾ｅ—ｒｅｌａｔｅｄ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｓｐｅｒｍ ｄｅ０ｘｙｒｉｂ０ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｆｏｒ ［１ ８］Ｃｏｌｌｉｎｓ ＪＡ，Ｂａｒｎｈａｒｔ ＫＴ，Ｓｃｈｌｅｇｅｌ ＰＮ．Ｄｏ ｓｐｅｒｍＤＮＡ ｉｎｔｅ ｔｙ ｔｅｓｔｓ ｐｒｅｄｉｃｔ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｗｉｔｈ ｉｎ ｖｉｔｒｏｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ？［Ｊ］．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒ－ ｉｌ，２００８，８９（４）：８２３－３１． ｍａｌｅ ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ，２００６，８５（２）：４９６－ ４９９． ［１９］Ｆｒａｓｅｒ Ｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｌ ｄａｍａｇｅ ｔａｏ ｎｕｃｌｅａｒ ＤＮＡ ｉｎｍａｍｍａｌｉａｎ ｓｐｅｒ－ ｍａｔｏｚｏａ：ｉｔｓ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓａｎｄ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈｍａｌｅ ｉｎ－ ［１４］Ｖｉｅａｒｉ Ｅ，Ｐｅｒｄｉｃｈｉｚｚｉ Ａ，Ｄｅ Ｐａｌｍａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｇｌｏｂｏｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ ｉｓ ｓｓｏｃｉａａｔｅｄｗｉｔｈ ｃｈｒｏｍａｔｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ：ｃａｓｅ ｒｅｐｏｒｔ［Ｊ］． Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ，２００２，１７（８）：２１２８－３３． ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｐｏｌ Ｊ Ｖｅｔ Ｓｃｉ，２００４，７（４）：３１１ ３２１． ［２０］Ｓａｋｋａｓ Ｄ，Ａｌｖａｒｅｚ ＪＧ．Ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｏｒｉｇｉｎ，ｉｍｐａｃｔ ｏｎｒｅｐｒｏｄｕｅｔｉｖｅ ｏｕｔｃｏｍｅ，ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｆｅｒ－ ｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２０１０，９３（４）：１０２７・１０３６． ［１５］Ｂｒｕｇｎｏｎ Ｆ，Ｖａｎ Ａｓｓｃｈｅ Ｅ，Ｖｅｒｈｅｙｅｎ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｗｏ ｍａｒｋｅｒｓｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｍｅｉｏｔｉｃ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｉｎ￣ａｃｕｌａｔｅｄｓｐｅｒｍ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｃａｒｉｔｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ， 收稿日期：２０１５－０３－２８修回日期：２０１５－０５－２０责任编辑：谢建平