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8.PCR方法扩基因片段

来源:智榕旅游
2014-7-2

BdVRT2基因cDNA片段的获得

(1)用反转录产物进行PCR,体系如下: 10×PCR buffer 5μL 25mM Mg2+ 3μL dNTP mixture(2.5mM) 4μL VR2-1-5'(10μM) 2μL VR2-1-3'(10μM) 2μL cDNA 1μL TaqE 0.5μL ddH2O up to 50μL (2)反应程序为:

94℃ 5min 94℃ 30sec

65℃ 45sec 35个循环 72℃ 50sec 72℃ 5min (3)反应完毕后,电泳检测结果;

将所得片段连入pMD18-T载体,转化大肠杆菌感受态DH5α,菌落PCR验证后进行序列测定。

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