一种新化合物及其制备方法和在抗衰老化妆品方面的用途[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 109134588 A(43)申请公布日 2019.01.04

(21)申请号 201811170331.4(22)申请日 2018.10.09

(71)申请人 王培战

地址 250355 山东省济南清区大学科

技园大学路4655号山东中医药大学北门南汝小区(72)发明人 王培战　(51)Int.Cl.

C07J 73/00(2006.01)A61K 8/49(2006.01)A61Q 19/08(2006.01)

权利要求书1页 说明书6页

()发明名称

一种新化合物及其制备方法和在抗衰老化妆品方面的用途(57)摘要

本发明公开了一种新化合物及其制备方法和在抗衰老化妆品方面的用途，所述化合物结构

式为所述化合物

对弹性蛋白酶具有抑制作用，可应用于制备抗衰老化妆品。

CN 109134588 ACN 109134588 A

权　利　要　求　书

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1.一种新化合物，其特征在于，其化学结构如下：

2.一种权利要求1所述的新化合物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)称取七层楼干燥根，粉碎后，加入提取溶剂回流提取，提取液浓缩后得到粗提物浸膏；

(2)粗提物浸膏分散于水中，用三氯甲烷萃取，收集三氯甲烷萃取液，浓缩后得到三氯甲烷萃取浸膏；

(3)取三氯甲烷萃取浸膏，用硅胶柱进行分离，先用石油醚-乙酸乙酯(50:1)洗脱10个柱体积，弃去洗脱液，再用石油醚-乙酸乙酯(10:1)洗脱10个柱体积，收集洗脱液，浓缩成浸膏；

(4)将步骤(3)所得浸膏继续经制备型高效液相色谱进行进一步分离，其中高效液相色谱条件为：C18色谱柱，流动相为65％甲醇进行洗脱，回收洗脱液，即获得目标化合物。

3.根据权利要求2所述的新化合物的制备方法，其特征在于：所述提取溶剂为75％乙醇-水溶液。

4.根据权利要求1所述的新化合物，其特征在于：对弹性蛋白酶有抑制作用。5.根据权利要求1所述的新化合物，其特征在于：可使皮肤紧致，改善皮肤皱纹或松弛。6.根据权利要求1所述的新化合物，其特征在于：用于制备抗衰老化妆品。

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CN 109134588 A

说　明　书

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一种新化合物及其制备方法和在抗衰老化妆品方面的用途

技术领域

[0001]本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种新化合物及其制备方法和在抗衰老化妆品方面的用途。

背景技术

[0002]弹性蛋白广泛分布于韧带、血管壁、肺、皮肤的真皮以及关节等需要伸缩性的器官。弹性蛋白使这些器官的组织具有弹性，在保持皮肤弹力或使皮肤紧致等方面发挥巨大作用。弹性蛋白酶具有降解胶原蛋白、弹性蛋白等多种蛋白质的能力。皮肤老化时弹性蛋白结构的改变是导致皱纹和皮肤松弛的重要原因之一，而抑制弹性蛋白酶分解弹性蛋白可以起到抗衰老抗皱的作用。

[0003]植物提取物作为天然弹性蛋白酶抑制剂是近年来研究的热点。制备直接涂抹于皮肤的化妆品，优选天然来源的成分，如虎耳草提取物、儿茶钩藤提取物、杜鹃花提取物在抗皱和改善皮肤松弛的方面有显著的效果，然而，其有效成分并不清楚。[0004]已知弹性蛋白酶抑制剂除了皮肤外用剂以外，还可以用于治疗急性呼吸窘迫综合征、急性肺功能障碍、动脉硬化、全身性炎症反应、慢性类风湿性关节炎、变形性关节病等疾病。

[0005]七层楼Tylophorafloribunda Miq.为萝藦科娃儿藤属多年生缠绕藤本，产于江苏、浙江、福建、江西、湖南、广东、广西和贵州等省区。生长于海拔500米以下阳光充足的灌木丛中或疏林中。根可药用，华南和江西民间用来治小儿惊风、白喉、跌打损伤、关节肿痛和蛇咬伤等。

发明内容

[0006]本发明的目的是提供一种新化合物，对弹性蛋白酶具有抑制作用，本发明还提供其制备方法，对七层楼根进行系统分离，筛选出活性更优的物质。[0007]本发明所述的新化合物，其化学结构如下：

[0008]

[0009]

本发明所述的新化合物的制备方法，包括如下步骤：

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CN 109134588 A[0010]

说　明　书

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(1)称取七层楼干燥根，粉碎后，加入提取溶剂回流提取，提取液浓缩后得到粗提

物浸膏；[0011](2)粗提物浸膏分散于水中，用三氯甲烷萃取，收集三氯甲烷萃取液，浓缩后得到三氯甲烷萃取浸膏；[0012](3)取三氯甲烷萃取浸膏，用硅胶柱进行分离，先用石油醚-乙酸乙酯(50:1)洗脱10个柱体积，弃去洗脱液，再用石油醚-乙酸乙酯(10:1)洗脱10个柱体积，收集洗脱液，浓缩成浸膏；[0013](4)将步骤(3)所得浸膏继续经制备型高效液相色谱进行进一步分离，其中高效液相色谱条件为：C18色谱柱，流动相为65％甲醇进行洗脱，回收洗脱液，即获得目标化合物。[0014]其中：提取溶剂选任意比例的乙醇-水溶液，优选为75％乙醇-水溶液。[0015]本发明所述的新化合物对弹性蛋白酶有抑制作用，可使皮肤紧致，改善皮肤皱纹或松弛，用于制备抗衰老化妆品。[0016]一、本发明中所述的化合物的结构确证[0017]黄色针状结晶，溶于甲醇。高分辨质谱得到m/z 456.1208[M+H]+(计算值456.1209)的分子离子峰，再结合1H NMR谱图和13C NMR谱图数据推测化合物的分子式为C27H20O7，进一步可知其不饱和度为18。在1H NMR谱图中，δH 7.42(d,1H,J＝1.8Hz,H-4),7.23(dd,1H,J＝8.5,1.8Hz,H-2)和7.69(d,1H,J＝8.4Hz,H-1)提示该化合物中有一个典型的ABX系统；此外，δH 5.02(d,1H,J＝17.5Hz)、δH 5.04(d,1H,J＝10.5Hz)和δH 6.28(dd,1H,J＝17.5,10.7Hz)，以及δC 146.8(C-8’)和111.0(C-9’)提示结构中含有末端双键。结合HSQC谱，对相关碳氢信号进行了归属，见表1。在HMBC谱图中，δH 7.69(H-1)和δC 124.9(C-2)、134.3(C-3)、1.7(C-4a)、158.5(C-11a)及104.2(C-11b)的信号相关，δH 7.23(H-2)和δC 122.8(C-1)、134.3(C-3)、119.2(C-4)及117.1(C-1’)的信号相关，δH 7.42(H-4)和δC 124.9(C-2)、134.3(C-3)、157.4(C-4a)、104.2(C-11b)及117.1(C-1’)的信号相关，结合氢谱所给出的信息，确定了C-1/C-2/C-3/C-4/C-4a/C-11a/C-11b/C-1’的连接方式；δH 7.43(H-7)和δC 146.5(C-8)、148.5(C-9)、107.0(C-6a)、117.0(C-6b)及152.0(C-10a)的信号相关，δH 7.41(H-10)和δC 146.5(C-8)、148.5(C-9)、117.0(C-6b)及152.0(C-10a)的信号相关，结合氢谱所给出的信息，确定了C-6a/6b/C-7/C-8/C-9/C-10/C-10a的连接方式；δH 6.58(H-3’/5’)和δC 117.1(C-1’)、146.9(C-2’/6’)、103.5(C-3’/5’)、134.3(C-4’)及40.1(C-7’)的信号相关，确定了C-2’/C-3’/C-4’/C-5’/C-6’/C-7’的连接方式；δH 1.51(H-10’/11’)和δC 134.3(C-4’)、δC 40.1(C-7’)、δC 146.8(C-8’)的信号相关，δH 6.28(H-8’)和δC 134.3(C-4’)、δC 40.1(C-7’)、δC 26.5(C-10’/11’)及δC 111.0(C-9’)的信号相关，δH 5.02(H-9’)、δH 5.04(H-9’)和δC 40.1(C-7’)、δC 146.8(C-8’)的信号相关，确定了C-4’/C-7’/C-8’/C-9’/C-10’/C-11’的连接方式；δH 5.92(-OCH2O-)和δC 146.5(C-8)、148.5(C-9)相关，提示连氧二苄基连接在C-8及C-9位上。综上信息，确定本发明所述的新化合物的化学结构为：

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[0018]

[0019]

表1 1H(600MHz)and 13C(150MHz)NMR Spectroscopic Data in CDCl3(δin ppm，J 

in Hz).

[0020]

[0021]

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二、化合物体外抑制弹性蛋白酶活性

[0023]1.仪器与试剂

[0024]KQ5200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；岛津UV-2600紫外分光光度计(日本岛津公司-济南谱分科技有限公司)；TGL-16C型台式离心机(上海安亨科学仪器厂)；刚果红-弹性蛋白(Sigma)；猪胰弹性蛋白酶(30U/mg，上海源叶生物科技有限公司)；硼酸(Sigma)；硼砂(Sigma)；磷酸(天津市科密欧化学试剂有限公司)；KH2PO4(天津市科密欧化学试剂有限公司)；Na2HPO4(天津市科密欧化学试剂有限公司)；西维来司钠(北京百诺威生物科技有限公司)。

[0025]0.02mol/L硼酸缓冲液(pH8.8)：取0.05mol/L硼酸液142.8mL与0.05mol/L硼砂液57.2mL混合，加蒸馏水至500mL；

[0026]0.5mol/L磷酸缓冲液(pH6.0)：取0.5mol/LNa2HPO4液29.4mL与0.5mol/L KH2PO4液470.6mL混合。

[0027]2.弹性蛋白酶溶液的配制[0028]准确称取弹性蛋白酶10mg，加pH8.8硼酸缓冲液100mL，使酶全部溶解。[0029]3.供试品溶液的配制

[0030]取阳性对照西维来司钠，加DMSO制成1μmol/L的溶液；取本发明所述化合物，加DMSO溶解，分别制成浓度为0.25μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L的溶液。[0031]4.弹性蛋白酶抑制活性测定[0032]取5个容量瓶，分别加入准确称取的刚果红-弹性蛋白20mg，空白瓶加入pH8.8的硼酸缓冲液3.0mL，对照瓶加入预热至37℃的弹性蛋白酶溶液及阳性对照溶液5μl，样品瓶加入预热至37℃的弹性蛋白酶溶液及不同浓度的供试品溶液5μl，混匀。置摇床中37℃充分震荡，准确保温20min，然后各瓶中加入杀酶剂磷酸缓冲液5.0mL，离心2000rpm，20min取上清液4.0mL分别置于另外试管中，各试管均加入1.0mLpH8.8硼酸缓冲液、pH6.0的磷酸缓冲液5.0mL，摇匀，于495nm测定吸光度。根据方程抵制率％＝[(1-△(测试-空白)/△(对照-空白)×100]计算抑制率，阳性对照药西维来司钠的弹性蛋白酶抑制率为100％。[0033]结果见表2。

[0034]表2本发明所述化合物对弹性蛋白酶的抑制活性

[0035]

以上结果说明，本发明所述化合物在浓度为0.5μmol/L时与西维来司钠1μmol/L对

弹性蛋白酶的抑制作用相当，1μmol/L时则优于西维来司钠。具体实施方式

[0037]下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但其并不本发明的实施。[0038]实施例1[0039](1)称取七层楼干燥根，粉碎后，加入75％乙醇回流提取，提取液浓缩后得到粗提

[0036]

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物浸膏；[0040](2)粗提物浸膏分散于水中，用三氯甲烷萃取，收集三氯甲烷萃取液，浓缩后得到三氯甲烷萃取浸膏；[0041](3)取三氯甲烷萃取浸膏，用硅胶柱进行分离，先用石油醚-乙酸乙酯(50:1)洗脱10个柱体积，弃去洗脱液，再用石油醚-乙酸乙酯(10:1)洗脱10个柱体积，收集洗脱液，浓缩成浸膏；[0042](4)将步骤(3)所得浸膏继续经制备型高效液相色谱进行进一步分离，其中高效液相色谱条件为：C18色谱柱，流动相为65％甲醇进行洗脱，回收洗脱液，即获得本发明所述化合物。

[0043]实施例2

[0044]处方例1面霜

[0045]

[0046]

面霜制法：将去离子水中加入丙二醇、L-羟基脯氨酸、亚硫酸氢钠和苯甲醇并溶

解，加热并保持70℃(水相)。本发明所述化合物与其它成分混合并加热熔化，保持70℃(油相)。在水相中缓慢加入油相，然后，用均质混合机均匀地乳化后一边充分搅拌一边冷却至30℃，即得。

[0047]处方例2乳液

[0048]

[0049]

本发明所述化合物

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[0050]

乳液制法：将去离子水中加入聚乙二醇1500和三乙醇胺，加热溶解并保持70℃(水

相)。本发明所述化合物与其它成分混合并加热熔化，保持70℃(油相)。在水相中加入油相并用均质混合机均匀乳化，乳化后一边充分搅拌一边冷却至30℃，即得。

[0051]

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