实验原理：LiCl最终浓度为2 mol/L 0.8 mol/L直接沉淀大分子RNA（包括rRNA和mRNA）
需要注意的是Li离子对反转录酶有抑制作用，而Cl离子能抑制蛋白质合成的起始步骤，所以在mRNA反转录和体外翻译实验前不要使用LiCl沉淀DNA和RNA NaAc最终浓度为0.3mol/L（Ph5.0）
①所用所有试剂：
Tris- CTAB：与RNA结合
β-巯基乙醇：防止被氧化 Tris饱和酚、氯仿：去蛋白质
5L LiCl、无水乙醇、70%乙醇、3 mol/L NaAc：使RNA沉淀 1×TAE、 BW：配制凝胶
Gol-rad或gold-view和6×loading buffer :前沿指示剂 ddH2O
②所有材料 用具
试剂瓶 、250烧杯 玻璃棒 250容量瓶 记号笔 天平 一次性手套 钥匙、 液氮 研钵、冰、线手套、枪、枪头、高压锅、电泳照相系统 离心机 、混摇机、恒温水浴、电泳仪、电泳槽 ③实验准备：
1、CTAB 5g 直接加入试剂瓶（防止起泡）
2、NaCl 20.44g + 0.5M EDTA 12.5ml 用ddH2O 定容至225ml 3、空瓶贴标签加适量（100或50ml）的ddH2O LiCl NaAc 70%乙醇 氯仿 ddH2O 4、6个瓶 + 0.1%DEPC 在通风橱里戴双层手套，充分摇匀，气泡不很快消失 5、37度保温过夜 注意事项：
1、 试剂瓶用洗洁精水浸泡一个小时，然后清水冲到不起泡，壁上不挂水珠，再用ddH2O
冲两次，量筒等量器清洗后都用ddH2O冲洗两次
2、 Tris 不可用0.1%DEPC处理，等其他组分处理完再加到CTAB中 3、 所有瓶子用0.1%DEPC处理，除了β-巯基乙醇，Tris饱和酚（购买时小瓶装，直接用即可）
所有水溶试剂用ddH2O配置
4、 加样器100-1000规格的，小于100则不准确 ④灭菌
1、将25ml Tris-HCl加入CTAB中， 2、瓶留一个缝，灭菌锅的桶中加适量水 3、枪头一层袋，离心管两层袋 4、共八个瓶
5、时间大概为一个半到两个小时 ⑤实验前准备
小研钵，杵，小钥匙中倒适量酒精，点燃，自灭后凉透（大概得30min）。 准备：液氮、材料（负40度）、垫纸（研钵下用）、手套（里外一层一次性手套，中间线手套）、冰（252）、恒温机（65度）、桌上多放一只一次性手套（放钥匙和杵）、将叶片放在手可触的地方
开始实验
1、 3-5倍体积（650ul Tris-CTAB提取缓冲液，50ulβ-巯基乙醇）的65度预热的提取缓冲液，
混匀
2、 根据实验需要，取每管0.1-0.5g叶片置液氮中冷冻，研磨成粉末。首先将研钵、杵和钥匙
充分冷冻（浇3-4次），加入叶片，加液氮，不超过五次。液氮多的时候轻磨，快没时用劲快磨，至白色为止。
3、 粉末加入准备好的离心管中，大概2匙柄，充分混匀，放在65度恒温浴中15min，每隔
2-3min摇一次，研钵和杵放水下冲，氯仿瓶放在冰中。
4、 加入一倍体积（700ul）的氯仿，用混摇机摇匀，12000rpm,离心10min,取上清。 5、 在冰中准备好离心管和氯仿，重复两次。
6、 准备好500+60ul 5mol/L LiCl，200+150 ul冷无水乙醇，60ul 3 mol/L NaAc， 加入430ul
上清液，静置15-30min，沉淀RNA
7、 12000 rpm离心10min，注意放的方向，抽去上清，RNA沉淀为无色胶体状 8、 用70%乙醇漂洗两次，切忌快速抽打，开口在通风橱里风干（大概15min），再加入20ul
的ddH2O，反复抽打混匀，置于冰中备用。
电泳检测 多准备一只一次性手套，带小枪
1、 配胶，1×TAE20 ml(稍多一点)、BW 0.8-1.0% g/ml（0.2g）于小锥形瓶中，轻摇（防
止气泡）加热完全融化，待降到60度（手摸不烫）时加6-10ul gold-view即可，倒在插好梳子的胶盒中，待凝（大概15min）
2、 电泳 恒压 60V左右（66） 或横流 45mA左右 30min 负极跑向正极
将电泳盒放入电泳槽中，加1×TAE没过胶面，将样品(1-4ul)和6×Loading
buffer(2 ul)在一次性手套上混匀加入到胶孔中，盖好盖电泳。
3、 将胶盒拿出到252，把胶放到检测室中检测照相。
样品保存 -40摄氏度或与无水乙醇以3：1充分混合后-40摄氏度保存
注：1、或者前沿指示剂只用gol-rad最后只与样品混匀即可 2、70%乙醇配置无水酒精按纯酒精即可。
3、整个实验过程禁止说话，即在没有条件的情况下，尽量创造一个无RNA酶的环境 4、实验提取过程尽量缩短时间,尽可能放在冰上
5、RNA沉淀为无色胶体状，白色明显沉淀是蛋白质等杂质 6、清洗RNA沉淀时确保沉淀不被冲走，确定其溶解在水中 7、电泳点样一定要迅速，准确，均匀 6、实验中遇到的问题：
1、只有一条带跑出来，且很清晰？
2、有拖尾或者是向前延伸？
降解，应对方法是：实验中样品尽量放在冰上进行 3、降解与震荡有无关系? 没有太大关系
4、电泳结果只在相对点样孔的一侧或是两侧有RNA显示？ 点样不均匀
5、电泳结果显示点样孔处有明斑？
样品中存在杂质，应对方法：实验步骤加氯仿去杂时应注意两点1、混合充分2、离心后取上清应缓慢，尽量避免蛋白层上的胶状杂质
6、电泳结果在28S和18S之后还有一条不太明显的条带？ 是DNA或者是5SRNA，应对方法：
7、电泳结果显示，两条带都有但是不明显？
点样量少，一般为4ul，或者是样品浓度低，注意取叶大小和各步骤中的损失 8、电泳结果，没有条带？
实验过程中RNA已经降解，应注意保持实验的低温和无RNA酶环境；或者是叶片
储存条件不够
9、电泳中有融胶现象？
调节电压或者电流，不可太大
10、样品第一次跑电泳结果只有一点显示，第二次则结果合格？ 校正点样
11、在沉淀RNA时有白色杂质沉淀怎么处理？
12、叶片未充分磨碎? 没有太大影响
13、叶片磨碎加样后发现离心管盖与壁之间夹着少量的绿色样品？
以上实验是本人在下载的，具体问题具体分析。。
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