第２７卷第３期 甘肃科学学报 Ｖ０ｌ＿２７ ＮＯ．３ ２０１ ５年６月 Ｊｏｕｒｎａ１ ｏｆ Ｇａｎｓｕ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊｕｎ．２Ｏ１５ 引用格式：Ｃｈａｉ Ｙｅ，Ｚｈｅｎｇ ｌａｙｉｎｇ．Ａ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｒｅｈｍａｎｎｉａ Ｒｏｏｔ＆Ｐｒｅ— ｐａｒｅｄ Ｒｅｈｍａｎｎｉａ Ｒｏｏｔ ｆｒｏｍ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｐｌａｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｎｓｕ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１ ５，２７（３）：３７—４０．［柴 烨，郑立颖．不同产地生地黄和熟地黄中毛蕊花糖苷含量的比较研究ｆ－Ｊ］．甘肃科学学报，２０１５，２７（３）：３７—４０．］ ｄｏｉ：１０．１６４６８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎｌ００４ ０３６６．２０１５．０３．０１０． 不同产地生地黄和熟地黄中毛蕊花糖苷 含量的比较研究 柴 烨 ，郑立颖 （１．甘肃省食品药品监督管理局审评认证中心，甘肃兰州 ７３００７０； ２．甘肃农业大学甘肃省中药材规范化生产技术创新重点实验室，甘肃兰州 ７３００７０） 摘 要 以甲醇为溶媒，超声提取地黄样品中毛蕊花糖苷，采用高效液相色谱法进行测定，流动相为 乙腈一０．１ 醋酸溶液（１６：８４），流速１．０ ｍＬ・ｍｉｎ～，Ｃ埔色谱柱分离，检测波长３３４ ｎｍ。考察不 同产地的生地黄和熟地黄中所含毛蕊花糖苷的含量，结果显示产地不同，生地黄和熟地黄中的毛蕊 花糖苷含量不同。建立的方法操作简便、准确、快速、干扰少，适用于生地黄和熟地黄中毛蕊花糖苷 含量的测定。 关键词 产地；生地黄；熟地黄；毛蕊花糖苷；高效液相色谱法 中图分类号：Ｒ２８６．１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００４—０３６６（２０１５）０３—０３７—０４ 地黄为玄参科植物（Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉ— 准奠定基础，实现更好地控制生地黄和熟地黄质量 ｂｏｓｃｈ），地黄的新鲜或干燥块根，始载于《神农本草 的目标。 经》，列为上品，为我国“四大怀药”之一。《中国药 典》２Ｏｌ０年版收载有鲜地黄、生地黄、熟地黄，三者 １仪器与材料 功效不同，鲜地黄凉血清火、生津止渴，生地黄清热 １．１ 仪器 凉血、养阴生津，熟地黄补血、滋阴。现代药理研究 Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪、Ｗａｔｅｒｓ９９６二极管阵 表明，地黄寡糖和环烯醚萜苷类成分梓醇均有降血 列检测器、Ｗａｔｅｒｓ６００泵，Ｃ 柱（１５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ， 糖作用＿ｌ’ ，苯乙醇苷类成分毛蕊花糖苷具有一定 ５ Ｍｍ，大连依利特），ＭＥＴＴＬＥＲ ＡＥ２４０电子分析 的促进成骨细胞增殖与分化的作用，提示其可能具 有抗骨质疏松活性作用 ］，《中国药典））２０１０年版将 天平（瑞典），ＦＺＱ一２涡旋混合器（江苏泰县医疗器 毛蕊花糖苷列为地黄的含量测定指标＿４］。地黄主产 械厂），微量进样器（上海安亭微量进样器厂）。 于河南、河北及内蒙古，我国大部分地区有栽培，其 １．２材料与试剂 中河南是其道地药材产地。《中国药典》２０１０年版 生地黄对照药材（中国食品药品检定研究院， 仅规定生地黄、熟地黄药材按照干燥品计算，含毛蕊 批号：ｌｌ８０－２００００１），生地黄（河南新乡、河南西 花糖苷不得少于０．０２ ，但不同产地生地黄、熟地 峡、河南三门峡、河南温县、河南淮阳、甘肃庆阳、甘 黄中毛蕊花糖苷含量可能有较大差别。因此，通过 肃清水、甘肃金崖、甘肃大康营），毛蕊花糖苷（中国 实验对不同产地的生地黄和熟地黄中毛蕊花糖苷做 食品药品检定研究院，纯度≥９２．５ ９／６，批号： 了初步考察，一方面检测市场流通的生地黄和熟地 １ｌｌ５３０—２０１２０８），其他试剂均为分析纯，水为重 黄的质量，另一方面为完善生地黄和熟地黄质量标 蒸水。 收稿日期：２Ｏｌ４—０５—１９；修回日期：２Ｏｌ４一Ｏ６—３Ｏ． 作者简介：柴烨（１９７５一），男，甘肃庆阳人，高级Ｔ程师，研究方向为中药质量控制．Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈａｉｙｅ７５＠ｌ２６．ｃｏｍ． 通讯作者：郑立颖．Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｅｎｇｌｙ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ． ３８ 甘肃科学学报 ２０１５年第３期 ２方法与结果 ２．１ 高效液相色谱含量测定方法 定容至２５ ｍＩ ，精密量取续滤液１５ ｍＬ，水浴蒸干， 残渣用流动相溶解，转移至５ ｍｉ 量瓶中，加流动相 至刻度，摇匀，０．４５／ａｍ滤膜滤过，续滤液备用。 称取熟地黄粗粉１．０ ｇ，精密称定，置于５０ ｍＩ 量瓶，加甲醇４５ ｍＩ ，超声提取３０ ｍｉｎ，放冷，用甲醇 （１）色谱条件Ｗａｔｅｒｓ９９６二极管阵列检测器、 Ｗａｔｅｒｓ６００泵，Ｃ”柱（１５０ ｍｉｔｔ×４．６ ｍｌＴｌ，５／ｘｍ），检 测波长为３３４ ｎｍ，流动相为乙腈一０．１ 醋酸溶液 （１６：８４），流速１．０ ｍＬ・ｍｉｎ一，柱温为室温，进样 量２０ Ｉ 。理论塔板数按毛蕊花糖苷计算应不低于 ５ ０００。 定容至５０ ｍＩ ，精密量取续滤液２５ｍｉ ，水浴蒸干， 残渣用流动相溶解，转移至５ ｍＩ 量瓶中，加流动相 至刻度，摇匀，０．４５／ａｍ滤膜滤过，续滤液备用。 （５）稳定性试验取同一产地生地黄、熟地黄供 试品溶液（河南新乡），放置室温，在同１天内每隔２ ｈ 进行测定，连续考察８ ｈ，测定峰面积，计算得生地黄 （２）对照品溶液的制备 称取毛蕊花糖苷对照 品适量，精密称定，用流动相乙腈一０．１ 醋酸溶液 （１６：８４）制成１００／ａｇ・ｍＩ 的溶液，０．４５／ａｍ滤膜 滤过，滤液备用。 （３）工作曲线与线性关系 精密吸取毛蕊花糖 苷对照品溶液ｌ ｍＩ 、２ ｍＩ 、３ ｍＩ 、４ ｍＩ一５ ｍＩ 水苏糖相对标准偏差ＲＳＤ（Ｒｅｌａｔｉｖｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｄｅｖｉａ— ｔｉｏｎｓ，ＲＳＤ）为１．５５ ，熟地黄水苏糖ＲＳＤ为１．６６ 。 （６）精密度试验取生地黄、熟地黄同一供试品 溶液（河南新乡），分别连续进样６次，测定峰面积， ６ ｍＩ 、７ ｍＩ 分别置于１０ ｍＩ 量瓶中，加甲醇定容， 在３３４ ｒｉｍ波长处测定吸收度，以浓度为横坐标，吸 收度为纵坐标，作标准曲线，结果表明，毛蕊花糖苷 在１Ｏ～７０“ｇ・ｍＩ 范围内线性关系良好。工作 曲线方程为Ａ＝＝＝一０．００１×Ｃ～０．０００ ２，，．一０．９９９ ３。 计算生地黄水苏糖峰ＲＳＤ为０．８５ ，熟地黄水苏 糖峰ＲＳＤ为０．９１ 。 （７）重现性试验 取同一生地黄、熟地黄（河南 新乡）６份，按供试品溶液制备项下进行制备，在上 述色谱条件下分别进样测定并计算ＲＳＤ为２．６９ 。 （８）加样回收率试验 取同一浓度的生地黄供 试品溶液６份，精密加入一定量的已知浓度的被测 （４）供试品溶液的制备２４ ｈ后，磨成粗粉。 取生地黄和熟地黄（河 南新乡）切成约５ ｍｍ的小块，经８０℃减压干燥 称取生地黄粗粉０．４ ｇ，精密称定，置于２５ ｍＩ 量瓶，加甲醇２０ ｍｌ ，超声提取３０ ｍｉｎ，放冷，用甲醇 成分对照品（供试品与对照品等体积混匀），依法测 定。平均回收率为９９．４３ ，ＲＳＤ为２．１１ ，结果 见表ｌ。 表１ 毛蕊花糖苷加样回收率试验结果 Ｔａｂｌｅ １ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ ｌｏａｄｉｎｇ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉ￣＠ｇｒ称样量量／ 花糖苷ｇ 毛蕊／ｍｇ 品量／ ｍ照ｇ 峰面积Ａ测 ｍｓ回 称 回 收率／ ２．２不同产地的地黄中毛蕊花糖苷含量测定 （１）色谱条件Ｗａｔｅｒｓ９９６二极管阵列检测器、 （２）供试品溶液的制备 取不同产地生地黄和 熟地黄切成约５ ｉｎｔｏ的小块，经８Ｏ℃减压干燥２４ ｈ 后粉碎。然后以高效液相色谱含量测定方法中供试 Ｗａｔｅｒｓ６００泵，Ｃ 柱（１５０ ｍｍ×４．６ Ｉｎｍ，５ ｍ），检 测波长为３３４ ｎｍ，流动相为乙睛一０．１ 醋酸溶液 （１６：８４），流速１．０ ｍＬ・ｍｉｎ一，柱温为室温，进样 量２０“Ｉ 。毛蕊花糖苷对照品、生地黄和熟地黄供 品溶液的制备进行操作，测定结果见表２。 由表２可以看出生地黄、熟地黄产地不同，其中 毛蕊花糖苷的含量也有所差异。河南产的生地黄中 毛蕊花糖苷的含量普遍较高，平均约为０．０６ ，而 甘肃产的生地黄中毛蕊花糖苷含量较低，平均约 试品的高效液相色谱图见图１，毛蕊花糖苷的保留 时间约９ ｍｉｎ。 第２７卷 柴烨等：不同产地生地黄和熟地黄中毛蕊花糖苷含量的比较研究 ３９ （）．０１６ ０．０ｌ４ Ｏ．Ｏ１２ ０Ｏ１０ ０．００８ （）． ）６ 为０．０２ ，两者相差３倍。河南不同地区所产熟地 黄中毛蕊花糖苷的含量基本一致，其中以河南新乡 略高于其他三地。甘肃产熟地黄中毛蕊花糖苷的含 量相差３倍，尤其甘肃金崖毛蕊花糖苷的含量仅为 河南新乡的１／４。 ｔ／ｍｉｎ 薅０．（Ｎ）４ ０．００２ ０ —０．ｏ０２ （ａ）毛蕊花糖苷对照品色谱图 （）０３５ ３ 讨论 对供试品含量的计算，采用工作曲线回归方程 Ｉ）．０３０ ０．Ｏ２５ 法和外标一点法两种方法比较［２ ，发现用外标一 ０．０２０ 矗０．０１５ 磐００１０ Ｉ）．０Ｏ５ Ｏ －０（Ｘ）５ ｔ／ｍｉｎ （ｂ）牛地黄供试品色谱图 （Ｊ（）８ Ｏ．Ｏ７ １）．Ｉ 乏 ０．Ｏ５ ．鑫（）（）４ Ｏ．０３ 磐 （）．Ｉ Ｏ．Ｏ１ ０ 一）Ｏ１ ｔ／ｍｉｎ （ｃ）熟地黄供试品色谱图 图１ 生地黄和熟地黄中毛蕊花糖苷测定ＨＰＬＣ色谱图 Ｆｉｇ．１ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ ｉｎ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ ａｎｄ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ 表２不同产地生地黄和熟地黄中毛蕊花糖苷含量测定结果 Ｔａｂｌｅ ２ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ０ｆ ｖｅｒｂａｓｃＯｓｉｄｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ ａｎｄ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ 点法计算的误差比用工作曲线回归方程法的误差 小。故实验中地黄寡糖含量测定均采用外标一点法 进行计算。 为了避免供试品的制备对毛蕊花糖苷含量测定 的影响，所用药材样品均粉碎后过４０目筛，并置五 氧化二磷干燥器中干燥２４ ｈ，水分测定均＜５ 。 由生地黄中毛蕊花糖苷的含量测定结果可以看 出，产地不同，其所含寡糖成分、含量差异较大，生地 黄样品中毛蕊花糖苷的含量高低相差近１Ｏ倍，熟地 黄样品中高低相差２～３倍。河南新乡、河南三门 峡、河南西峡、甘肃清水、甘肃金崖５个产地生地黄 中毛蕊花糖苷的含量普遍高于熟地黄，与文献资料 一致 ］。毛蕊花糖苷的含量与生地黄块根的外形大 小有一定相关性，块根较大的毛蕊花糖苷含量高，块 根小的含量低ｌ８ ；熟地黄毛蕊花糖苷含量较低可能 是鲜药材在烘制过程中，温度过高，毛蕊花糖苷受热 破坏所致。。“ 。 实验过程中，通过对超声和煎煮两种提取方法 以及药材干燥条件的考察，发现药材在９Ｏ℃以上 干燥以及药材粗粉提取时间超过１ ｈ，易导致水苏 糖分解成甘露三糖和果糖。地黄中所含毛蕊花糖 苷是一种苯乙醇苷类化合物，在鲜地黄制成生地 黄、熟地黄的过程中，受温度、炮制辅料影响，部分 毛蕊花糖苷脱去端基单糖或糖苷键断裂，导致毛蕊 花糖苷含量降低。药材中无机元素分析提示道地 产区与其他产区确有一定差异＿１ 。实验中也发现 个别产地样品检测不到甘露三糖和楝二糖，造成不 同产地生地黄所含寡糖成分与药材质量和道地性 的关系还需要进一步探究。因此，将毛蕊花糖苷含 量、寡糖成分、梓醇以及无机元素共同作为地黄的 考察评价指标。一方面为今后完善地黄药材质量 标准提供依据，另一方面有望为地黄在甘肃的种植 选择适合的地域环境，保障所生产地黄药材的品 ４０ 甘肃科学学报 ２０ｌ ５年第３期 质，增加种植收入。 参考文献： ［１］ 阴健，郭力弓．中药现代研究与临床应用［Ｍ］．北京：学苑出版 社，１９９４． 测定及提取 Ｔ：艺优化ＥＪ］．中药材，２Ｏ１２。３５（８）：１ ３１８—１ ３２２． ［６］ 陈天朝，翟来超．ＨＰＩ Ｃ同时测定生地黄中梓醇和毛蕊花糖苷 的含量［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１ｌ，１７（５）：１０５—１０７． ［７］ 刘彦飞，赵宇，武卫红，等．生地黄的化学成分及其在加Ｔ炮 制过程中的变化［Ｊ］．国外医药（植物药分册），２００７，２２（３）： ｌＯ２ １０７． ［２］张汝学，贾正平，李茂星，等．地黄寡糖对２型糖尿病大鼠外周 血像、激素水平和胰岛病理学的影响ＥＪ］．西北国防医学杂志， ２００９，３０（３）：Ｉ６１—１６４． ［８］ 王太霞，李景原，胡正海．生地黄的形态结构与化学成分研究 进展［Ｊ］．中草药，２００４，３５（５）：５８５—５８７． ［９］ 郝武常，朱宇红，朱志峰，等．炮制对生地黄中毛蕊花糖苷含 ［３］ 陈微娜，李飞，朱盼盼，等．毛蕊花糖苷对新生大鼠体外培养 成骨细胞增殖与分化作用研究［Ｊ］．海峡药学，２０Ｉ２，２４（４）： ２３－２４． 量的影响口］．中国中药杂志，１９９７，２２（６）：３４５—３４６． ［１Ｏ］ 王宏洁，边宝林，杨健，等．生地黄中毛蕊花糖苷变化条件的探 讨［Ｊ］．中国中药杂志，１９９７，２２（７）：４０８—４０９． ［１１］ 宋平顺，赵端玮，赵建邦，等．当归药材中无机元素的主成分分 ［４］国家药典委员会．中华人民共和国药典［Ｍ］．北京：中国医药 科技出版社，２０１０， ［５］黄莉婷，孙少平，郑颖．生地黄中梓醇和毛蕊花糖苷的ＨＰＩ ｃ 析和聚类分析口］．甘肃科学学报，２０ｉ３，２５（１）：１ ７ ２０． Ａ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｒｅｈｍａｎｎｉａ Ｒｏｏｔ＆ Ｐｒｅｐａｒｅｄ Ｒｅｈｍａｎｎｉａ Ｒｏｏｔ ｆｒｏｍ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｐｌａｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｃｈａｉ Ｙｅ ，Ｚｈｅｎｇ Ｌｉｙｉｎｇ （１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ＆Ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇａｎｓｕ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００７０，Ｃｈｉｎａ ２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ＴＣＭ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｇａｎｓｕ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００７０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ ｗａｓ Ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ ｓａｍｐｌｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｔｈｅ ｓｏｌｖｅｎｔ，ａｓｓａｙｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＩ Ｃ），ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｂｙ Ｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ ａｎｄ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ一０．１ ９／６ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｓｐｅｅｄ ｏｆ ｔ．０ ｍＩ ・ｒａｉｎ ，ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ３３４ ｎｍ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ ｃｏｎ— ｔｅｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｄ ｉｎ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ ａｎｄ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｈｕｓ，ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ ａｎｄ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｐｌａｃｅ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ；Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ；Ｐｒｅｐａｒｅｄ ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｒｏｏｔ；Ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ；ＨＰＩ Ｃ
