阿莫西林克拉维酸钾分散片的质量标准研究

阿莫西林克拉维酸钾分散片的质量标准研究

【摘要】 目的：建立简便快捷的阿莫西林克拉维酸钾分散片中阿莫西林和克拉维酸有关物质的HPLC测定方法。方法：采用BDS HYPERSIL C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为0.05moL・L-1磷酸二氢钠溶液(用10%磷酸溶液或氢氧化钠试液调节pH至4.4)-甲醇(95:5)，检测波长为220nm，流速为1.0 mL・min-1，进样量为20μL，柱温为25℃。结果：此条件下，阿莫西林克拉维酸钾分散片中各杂质和其他降解产物与主成分的分离度和检测灵敏度均可满足试验要求。结论：采用HPLC测定阿莫西林克拉维酸钾分散片中阿莫西林和克拉维酸的有关物质，方法简便、结果准确可靠，适用于该制剂的质量控制。

【关键词】 阿莫西林克棒酸钾合剂;色谱法/高压液相;质量控制

【ABSTRACT】Objective:To build a more convenient way for detecting related substances of high performance liquid chromatography in.Amoxicillin and Clavulanate Potassium dispersible tablets.Methods:The separation was performed on BDS HYPERSIL C18 column(4.6mm×250mm，5μm)，setting a mobile phase of 0.05moL・L-1 sodium dihydrogen phosphate(adjusted to pH 4.4 with 10% phosphoric acid or sodium hydroxide test solution)- methanol(95∶5)，and the detected wavelength was 220mm，velocity was 1.0mL・min-1 and injection volume was 20μL with the column temperature 25℃.Results:Under this condition，Amoxicillin and Clavulanate Potassium dispersible tablets in various impurities，other degradation products，principal component of separation and

the detection sensitivity could satisfy test requirements.Conclusion:The method developed is successfully used to determine Amoxicillin and Clavulanate Potassium dispersible tablets related substances，so it can be used for quality control of Danhuang Tablets.

【KEY WORDS】Amoxicillin-potassium clavulanate combination，Chromatography/High pressure liquid，Quality control

阿莫西林-克拉维酸钾是阿莫西林与β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸钾的复合制剂，克拉维酸钾是一种新型强效β-内酰胺酶抑制剂，它与阿莫西林制成复方制剂，可以增强阿莫西林对产β-内酰胺酶菌种的抗菌活性，且对多数产β-内酰胺酶的细菌也有明显的抗菌活性，临床应用广泛，疗效显著[1]，目前在国内已成为常用抗生素[2]。本品在《国家药品标准》WS1-(X-149)-2004Z有收载，但未见有关物质的检测方法，而即将实行的《中国药典》2010年版把本品收录在册，并规定了有关物质的检测方法。我们研究建立了不同色谱条件的HPLC法测定阿莫西林克拉维酸钾分散片中阿莫西林和克拉维酸的有关物质的检测方法，经方法学验证，确认该方法可用于控制目前国内生产企业该产品的质量。

1仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪;AG285电子分析天平。阿莫西林对照品(中国药品生物制品检定所，批号130409-200208，含量86.2%);克拉维酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号130409-200203，含量95.0%);阿莫西林克拉维酸钾分散片(7∶1)(规格：228.5mg，阿莫西林200mg、克拉维酸28.5mg);甲醇、乙腈为色谱纯;其他制剂均为分

析纯。

2方法学考察与结果

2.1色谱条件

色谱柱BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm);流动相：0.05moL・L-1磷酸二氢钠溶液(用10%磷酸溶液或氢氧化钠试液调节pH至4.4)-甲醇(95∶5);检测波长：220nm;流速：1.0mL・min-1;进样量20μL;柱温25℃。

2.2方法专属性考察

分别取阿莫西林、克拉维酸对照品，阿莫西林克拉维酸钾分散片细粉以及空白溶液蒸馏水，加水稀释成每1mL中含阿莫西林1.0mg和克拉维酸0.14mg的溶液，按照2.1色谱条件下测定，结果表明阿莫西林的出峰时间为8.3′，克拉维酸的出峰时间为4.9′，空白溶液对样品无干扰，说明专属性良好(图1)。

2.3破坏性实验

2.3.1酸破坏实验

称取本品63.29mg置100mL量瓶中加水30mL使溶解，加1mol・L-1的盐酸溶液5mL，室温放置2min，加1mol・L-1的氢氧化钠溶液5mL至中性，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μL进样，记录色谱图(图2A)。

2.3.2碱破坏实验

称取本品63.69mg置100mL量瓶中加水25mL使溶解，加1mol・L-1的氢氧化钠溶液0.5mL，室温放置0.5min，加1mol・L-1的盐酸溶液0.5mL至中性，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μL进样，记录色谱图(图2B)。A.空白溶液(blank solution)B.样品(sample)C.对照品(reference substance) 图1HPLC方法专属性考察图谱A.酸破坏(destroyed by acid)B.碱破坏(destroyed by alkali)C.氧化破坏(destroyed by oxidation)图2破坏性试验色谱图

2.3.3氧化破坏实验称取本品64.02mg置100mL量瓶中加水15mL使溶解，加30%双氧水0.5mL，室温放置1min后，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μL进样，记录色谱图(图2C)。

2.4线性关系考察

精密称取阿莫西林对照品74.80mg置50mL量瓶中，另取克拉维酸对照品9.70mg置同一量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，分别移取1、2、3、4、5、6、7mL置100mL量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度ρ(μg・mL-1)对峰面积(A)做线性回归，得回归方程：A阿莫西林=30.425ρ+974.64，r=0.999 2;A克拉维酸=39.782ρ+3.857 1，r=0.999 5。结果表明，阿莫西林在128.96~902.69μg・mL-1内线性关系良好，克拉维酸在18.43~129.01μg・mL-1内线性关系良好。

2.5精密度实验

精密称取样品80.27mg置50mL量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μL进样7次，测定峰面积，RSD阿莫西林=1.2%，RSD克拉维酸=0.19%，结果表明精密度良好。

2.6回收率实验

按处方量的80%、100%、120%，精密称取阿莫西林轻粉和克拉维酸钾微晶纤维素(1∶1)各三份，按处方配比加入辅料，分别置于250mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，照2.1色谱条件下测定，计算回收率(表1)。表1回收率测定结果

2.7检测限的确定

当阿莫西林信噪比(S/N)约为3.8时，阿莫西林的最小检测限为0.63ng;当克拉维酸信噪比(S/N)约为3.0时，克拉维酸的最小检测限为0.31ng。

2.8耐用性实验

改变液相色谱法中典型的变动因素：流速、柱温、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱等因素，分别取本品进行有关物质的检查。结果表明，在改变测定条件(流速、柱温、色谱柱等)下，有关物质的测定结果几乎不受影响，说明此法耐用性很好(表2)。

2.9有关物质测定

取本品，研细，精密称取适量(约相当于阿莫西林20mg，克拉维酸2.85mg)，置100mL量瓶中，加水适量超声使溶解，以水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液;精密量取供试品溶液1mL，置50mL量瓶中加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照2.1下的色谱条件进行测定，取对照溶液20μL进样，调节仪器灵敏度，使克拉维酸主成分峰高约为满刻度的20% ~25%，另精密量取上述两种溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至阿莫西林主峰保留时间的2倍。供试品溶液中如显杂质峰，各杂质峰的峰面积之和不得大于对照溶液中两个主成分峰面积之和的1.5倍(3.0%)。并与《中国药典》2010年版方法测定结果比较(表3)。表2不同条件下测得的有关物质检查结果条件对照溶液面积杂质总面积有关物质平均值表33个厂家的有关物质检查结果

3讨论

3.1太阳石圣大药业有限公司研究的HPLC测定阿莫西林克拉维酸钾分散片中阿莫西林和克拉维酸的有关物质的方法，与2010年版中国药典采用HPLC梯度洗脱方法相比，操作更加简便、快捷，减少了许多生产企业不能使用梯度洗脱方法检测有关物质的难题。

3.2本实验关于流动相的选择，未使用2010年版中国药典中采用的乙腈，而是选用价格较低的甲醇，有助于降低检验成品。经方法学验证，结果表明两种检测方法无明显差异，本色谱系统专属性强，耐用性好，且对色谱柱无损伤作用。

3.3有关物质的限度 我们利用此方法对国内3个生产厂家的各3批样品进行了检验，结果有关物质各杂质峰的峰面积之和均不大于对照溶液中两个主成分峰面积之和的3.0%，因此将限度定为杂质总量不得过3.0%，高于2010年版中国药典中的规定。检测

结果表明本法具有简便、快捷、准确等优点，可用于国内生产企业阿莫西林克拉维酸钾分散片(7∶1)有关物质的测定。

参考文献

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3国家药典委员会编.《中国药典》\\[S\\].2010年版.二部.北京：中国医药科技出版社，2010.313-314.

4阿莫西林克拉维酸钾分散片(2∶1)国家药品试行标准YBH12692004\\[S\\].

5阿莫西林克拉维酸钾分散片(7∶1)国家药品标准WS1-(X-149)-2004Z\\[S\\].

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