AM-AM-FS-Is-0261 酪蛋白和酪蛋白酸中蛋白质含量的测定

AMAMFSIs0261  酪蛋白  蛋白质  滴定法

AM-AM-FS-Is-0261

酪蛋白和酪蛋白酸中蛋白质含量的测定

1.适应范围：

本方法适用于酪蛋白和酪蛋白酸中蛋白质含量的测定。不包括酪蛋白酸铵、其它含铵化合物、其它含氮但无蛋白化合物的测定。

2.原理概要：

用硫酸钾和硫酸的混合液浸提样品，在硫酸铜的催化下，将有机氮转化为铵。蒸馏，用硼酸溶液吸附氨。再用标准盐酸溶液滴定，再将结果乘以系数6.38。

3.仪器和试剂：

3.1试剂：

3.1.1 浓硫酸：1.84g/ml

3.1.2 硫酸钾：无水

3.1.3 CuSO₄·5H₂O

3.1.4 蔗糖

3.1.5 硼酸：40g/l

3.1.6 NaOH溶液：30%（m/m）

3.1.7 盐酸: 0.1N

3.1.8 混合指示剂：

等体积的甲基红（2g/l）和乙醇(95%)混合

等体积的亚甲基兰（1g/l）和乙醇(95%)混合

3.2仪器：

3.2.1 分析天平

3.2.2 长颈瓶：500ml

3.2.3 浸提装置：

3.2.4 冷凝器

3.2.5

3.2.6 防溅球管

3.2.7 锥形瓶：500ml

3.2.8 量筒：50ml,100ml

3.2.9 滴定管

3.2.10 沸石：

3.2.11 研磨装置

3.2.12 测试筛子：金属网，直径200mm，孔径500μm，见ISO 3310/1

4.方法概述：

4.1采样：参见ISO/R 707

4.2样品处理：

4.2.1 振荡或翻转容器直接混合样品（如果必须，将混合后的样品转移到具有足够空间的密封容器中）

4.2.2 转移50g混合均匀的样品通过筛子

4.2.3 若样品全部通过或几乎全部通过，则直接用于下一步的样品检测

4.2.4 否则，研磨样品直到可以全部过筛。装入密封容器，振荡均匀。

4.2.5 处理后，尽可能快进行检测

4.3无蛋白氮的测试试验

    将1g样品、10ml水、100g氧化镁加入锥形瓶中，在锥形瓶品塞入石蕊试纸。60-65℃水浴加热。如果试纸15分钟内变兰，说明有氨存在，则此方法不适用。

4.4空白实验

用0.5g蔗糖代替样品进行测定。

若空白测定用量超过0.5ml酸（0.1N），则应对试剂进行提纯或更换。

4.4 制备测试样品：

    称取0.3g-0.4g样品于长颈瓶中，精确到0.1g。

4.5 检测样品：

4.5.1 加入少许瓷片，15g无水硫酸钾、0.2g硫酸铜、20ml浓硫酸，混合均匀。

慢慢加热提取装置，直至气泡消失。微沸至澄清，呈现淡蓝绿色。继续加热90min。

冷却至室温，加200ml水和少许浮石。

4.5.2 将50ml硼酸、4滴指示剂加入锥形瓶中，混合均匀。

将锥形瓶放在冷凝器出口下方，使提取液滴入硼酸中，再加入80ml氢氧化钠溶液。迅速将冷凝装置连接。

首先微沸，防止气泡生成，大约30分钟蒸馏完毕。蒸溜液应低于25℃.

4.5.3 用标准盐酸溶液滴定蒸馏液。

5.精密度：

5.1 重复性

    20次中不超过1次的情况可以是：在较短时间内，由同一分析者用同一装置对同一测试样品进行的两次检测结果相差每100g样品蛋白含量超过0.5g。

5.2 再现性

20次中不超过1次的情况可以是：由不同分析者用不同装置对同一测试样品进行的两次检测结果相差每100g样品蛋白含量超过1.0g。

6.来源：

    国际标准化组织ISO 59-1978（E）