AM-AM-FS-Ac-14034 食品中的锌

AMAMFSAc14034  食品  锌  比色法

AM-AM-FS-Ac-14034

食品中的锌

1.原理概要

    方法包括:样品的湿法氧化;加入Cu作清除剂，将Pb，Cu，助，Bi，Sb，Sn，Hg，Ag等离子以硫化物形态除去；用CHCl₃萃取同时除去Co的α-亚硝基-β-奈酚配合物和Ni的丁二酮肟配合物；先把Zn的双硫腙盐萃取到CCl₄层，然后转入稀HCl中，最后用Zn的双硫腙萃取液作比色测定。

2.试剂

    (全部H₂O皆用玻璃仪器重蒸纯化。只能用Pyrex玻璃器皿，且必须经过热HNO₃的严格洗涤。如果HNO₃和NH₄OH受到比较明显的污染，可用Pyrex玻璃器皿蒸馏纯化，但这对HNO₃来讲通常不是必要的。若怀疑H₂SO₄试剂中可能含Zn，应检查确认)。

    (a)硫酸铜溶液——2mg Cu/ml。溶解8g CuSO₄·5H₂O于H₂O中并稀释至1L。

    (b)柠檬酸铵溶液—将225g (NH₄)₂HC₆H₅O₇溶于H₂O，以酚红为指示剂，用NH₄OH调节使溶液呈碱性(刚好能分辨颜色变化时溶液的pH为7.4)，再加715ml过量的NH₄OH，稀释至2L。溶液临用前还要作下述萃取：加入稍过量的双硫腙，用CCl₄萃取至有机层呈透明的亮绿色。过量的双硫腙用CHCl₄萃取多次除去。最后再用CCl₄萃取一次。(必须将过量的双硫腙完全除去，否则在以后除Co和Ni时会损失Zn。)

    (c)丁二酮肟溶液——将2g试剂溶于10ml NH₄OH和200—300ml H₂O中，过滤，稀释至1L。

    (d)α-亚硝基书奈酚溶液——溶解0.25g试剂于CHCl₄中并稀释至500ml。

    (e)氯仿——重蒸。

    (f)二苯基二硫代卡巴腙 (双硫腙)溶液——溶解0.05g双硫腙于2ml NH₄OH和100ml H₂O中，反复用CCl₄萃取，直至有机相呈透明的亮绿色。弃去有机相，水相用洗涤过的无灰滤纸过滤。(该溶液最好根据需要配制。因为即使贮存于冰箱暗处，溶液也只是中等程度的稳定。)

    (g)四氯化碳——重蒸。

    (h)稀盐酸——0.04N。将需要量的HCl以H₂O稀释至浓度(可以使用重蒸馏纯化的酸。但通常没有这个必要。)

    (i)锌标准溶液—— (1)贮备液——500μg/ml。溶解0.500g纯颗粒Zn于稍过量的稀HCl中并稀释至1L。(2)工作液——5μg/ml。将10ml贮备液以0.04N HCl稀释至1L。

3.试验过程

3.1.样品的制备

    称取≤25g，含Zn量大至为25—100μg的有代表性的样品于适当大小的锥形瓶中。若为液体样品，可蒸发至较小体积。加入HNO₃，仔细加热至最初的剧烈反应稍微平息后，加入2-5mlH₂SO₄，继续加热，其间为了不使溶液碳化，可据需要不时添加少量HNO₃。待生成大量的SO₃烟雾，溶液保持澄清而近乎无色，加入0.5ml HClO₄，并加热将HClO₄几乎全部除去。冷却，稀释至约40ml。(湿法消化及其后的硫化物分离也可在小克氏烧瓶中方便地进行。)

3.2.硫化物组的分离

    加2滴甲基红和1ml CuSO₄溶液于上述样品的H₂S叫溶液中，用NH₄OH中和。加入足量HCl使溶液酸度大致为0.15N (50ml溶液，酸过量约0.5ml即可)。溶液此时的pH若用玻璃电极测定应为1.9—2.1。通入H₂S使溶液沉淀完全。用细密滤纸(滤纸预先置于漏斗上，依次用HCl(1+6)和重蒸水洗涤)过滤，滤液承接于250ml烧杯中，烧瓶和滤纸用少量H₂O洗涤3—4次。小心加热滤液，保持沸腾，直至嗅不出H₂S气味。加入5ml饱和溴水，继续加热沸腾至不含Br。冷却，以酚红为指示剂，用NH₄OH中和，然后加入HCl使溶液略呈酸性 (1+1的HCl过量0.2ml)。溶液稀释至一定体积。测定时溶液的最佳浓度为0.2—1.0 μg Zn/ml。

3.3.镍和钴的除去

    移取样品制备液20ml于125ml分液漏斗中，加入5ml柠檬酸铵溶液，2ml 丁二酮肟溶液和10mlα-亚硝基-β-萘酚溶液，振摇2min，弃去有机溶剂层。再用10ml CHCl₃萃取，以除去残余的α-亚硝基-β-萘酚，弃去有机层。

3.4.锌的分离与测定

    经过除Ni，Co处理的水相，其pH为8.0—8.2，加入2.0ml双硫腙溶液和10ml CCl₄，振摇2min，待其分层后，用与真空系统连接的吸管将水相尽可能吸除干净。用约25ml的H₂O淋洗分液漏斗内壁，不振荡，直接将水层弃去。加入25ml 0.04N HCl。振摇1min;使Zn转入酸性水相，放出有机相并弃去，仔细除去浮在液面上的有机液滴。加5ml柠檬酸铵溶液和10mlCCl₄于酸性溶液中(此时溶液pH为8. 8—9.0)。

    用下述方法决定双硫腙溶液的加入量:加4.0ml Zn标准工作液(20μg)于分液漏斗中，用0.04N HCl稀释至2.5ml，加入5ml柠檬酸缓冲液及10.0ml CCl₄然后开始往溶液中加双硫腙试剂，每次加0.1ml并稍事振摇，继续加至水层出现微弱的黄色，表明试剂已过量。加入的双硫踪总量乘以1.5，即是样品应加入的双硫腙量。所有样品都应加入该量的双硫腙(准确到0.05ml)，振摇2min，准确移取5ml有机层于干燥洁净的试管中，用10mlCCl₄稀释，混匀后测定0nm波长的T(或A)值。

3.5.标准曲线的制作

    取一系列分液漏斗，分别加入0，5，10，15及20μgZn，以0.04N的HCl稀释至25ml，

加入5ml柠檬酸缓冲液，按F最后萃取Zn的步骤进行。

     以T的对数 (或直接用A)对浓度作图，通过各点画出光滑曲线(由于最后用于萃取的双硫腙实际浓度不同，各天作出的工作曲线截距略有差异，但斜率保持不变)。

4.来源

AOAC官方方法944.09*