AMAMFSAc19060 槭糖浆 苹果酸 离子交换法
AM-AM-FS-Ac-19060
槭糖浆中的苹果酸
1.仪器和试剂
1.1 仪器
(a)离子交换管——标准派热克斯玻璃管，内径1Omm，长30Omm,5cm毛细管尖头。
(b)分光光度计——适合于测39Onm处的吸光度A，带配套的1cm液槽或测试管。
1.2 试剂
(a)离子交换树脂——(1)阳离子交换树脂——DoWex-50(60-80目)。（2）阴离子交换树脂——AGL-×8(50-100目)。
(b)(NH4)2CO3溶液——0.125Mol/L 。将14.26g(NH4)2C03·H2O溶解于水中,再用水稀释到1L。
(c)(NH4)2CO3溶液——0.5Mol/L。将57.05g(NH4)2C03·H2O溶解于水中，再用水稀释至1L。
(d)Na2CO3溶液——0.5Mol/L 。将5.3gNa2C03溶解在水中，再稀释到1OOml。
(e)HCl溶液——5%。12ml HCl+88ml水配制而成。
(f)2,7-奈二酚溶液——将1g试剂溶解于1O0ml H2S04中配制而成。
(g)苹果酸标准溶液——在40℃下将L-苹果酸干燥18h。取0.200Og溶解在500ml中。
取已知体积的该溶液(约1Oml)稀释到1OOml，使该稀释液与显色剂反应之后的吸光度A值在0.2-0.8之间。
2.试验过程
2.1.离子交换柱的制备
每个柱可取1Oml干树脂，用足够量的水拌成浆，然后用玻璃棉塞住柱的下口，将树脂浆倒入。排水至近树脂平面，每次加2ml水洗树脂使之平衡。对阳离子交换树脂(Dowex-50)，加3或4次1Oml 5%HCl，每次加之前让上次的酸排出至尽量接近树脂平面。再用水洗到无酸，每次用1Oml水,直到检验流出液中C1-显负的反应(大约需要4倍体积水)。
对阴离子交换树脂用3—4份10ml 15% NaOH洗，每次洗前让碱尽量接近树脂平面。用水(每次1Oml)洗至用pH试纸检验时，流出液对碱呈负反应。用加3(或4)份10ml 0.5Mol/L Na2CO3，的方法将树脂转化为CO32-型。用水(每次1Oml)洗至用pH试纸检验时，流出液呈中性。将平衡的阳离子交换树脂垂直地安装在平衡了的阴离子交换柱上方，通过阳离子交换柱下的导管与阴离子柱上口所带的单孔橡皮塞使两个柱连接。不需装活塞，将细树脂填紧，防止树脂中流体流干(变干了的树腊将失去活性)。
2.2.苹果酸的分离
转移大约10ml糖浆样品到己称量过的1Oml容量瓶中(称量至±0.2mg)，用水稀释至刻度。转移含(6-2O)mg苹果酸溶液(约l5ml)到阳离子交换柱中，使其经洗脱到阴离子交换柱。用3×1Oml水洗阳离子交换柱，让洗脱液流经阴离子交换柱，移去阳离交换柱，用3×1Oml水洗下面的阴离子交换柱以除去糖类及其它结合比较弱的可能引起干扰的酸。然后用5×1Oml 0.0625Mol/L (NH4)2CO3以洗去原样品中可能存在的乙醇酸、甘油酸或乳酸等。最后用5×1Oml 0.5Mol/L (NH4)2CO3洗脱苹果酸，用250ml容量瓶收集(45～48)ml流出液，用水稀释至刻度，摇匀。
2.3.测定
转移1ml苹果酸的(NH4)2CO3，洗脱液到18X15Omm的培养管中，从滴定管中缓慢地加6ml 95% H2SO4，前2ml沿壁加入以避免CO2的放出过于激烈。加0.1ml 2,7-奈二酚溶液，充分混合，用金属帽盖子盖紧管口；在沸水浴中加热25min以显色。使管子冷却，在3Omin内用1cm的液槽于39Onm处测显色液的吸光度A值，空白由1ml水+6ml H2S04+0.1ml显色剂组成，该空白也需在沸水浴上加热25min。
样品显色符合比耳定律:a=A/Cb,其中a为吸光度系数，C为浓度(mg/ml)b为液槽的厚度。由于空白的变化，吸光度一天与另一天之间会有变化。所以a值必须通过每天测定2份新鲜的苹果酸标准液加以确定。根据苹果酸标准与显色剂反应后的溶液在39Onm处的吸光度A计算a值。根据C=(A/ab)×(稀释系数)来计算样品中苹果酸的量。将糖浆中的苹果酸用标准密度(65.5℃，白利)糖浆的方式表示。
3.来源
AOAC 官方方法959.13（第17版）