AM-AM-FS-Ac-14028 食品中的汞

AMAMFSAc14028  食品  汞  双硫腙比色法

AM-AM-FS-Ac-14028

食品中的汞

1.原理概要

样品用HNO₃及H₂SO₄于特殊仪器中回流消化，用双硫腙萃取分离Hg，Cu被除去，而Hg的双硫腙配合物则可用比色法测定。

2.仪器和试剂

2.1 仪器

(因Hg化合物容易吸附于玻璃器皿上，仪器、特别是分液漏斗要经过稀HNO₃洗涤，再用H₂O冲洗。)

特殊消化仪——见下图。仪器用Pyrex玻璃制成，全部采用标准接口。A是改装的索氏提取器，外径5cm，溢流孔以下容积200ml。没有内部虹吸管，但在通向消化瓶D的管中装以活塞。活塞打开时，仪器处于回流状态;活塞关闭，A则作为冷凝H₂O及酸的收集阱。A的顶部与35cm长的FriedrichS冷凝管相接，底部与500ml具24/40标准接口的二颈圆底烧瓶D的颈管相接，圆底烧瓶两颈管间距3cm，以给出空隙。第二颈管与75ml的滴液漏斗B相接。

2.2 试剂

(a)汞标准溶液——(1)贮备液——1mg/ml。用干燥的重结晶HgCl₂配制(67.7mg/50ml),(2)工作液——2μg/ml浓度比较合适。用贮备液稀释而成并贮存于Pyrex玻璃瓶内。所有标准液在稀释定容前均按8ml/L的比例加入HCl。

(b)氯仿——见14-11 B(b)。

(c)双硫腙溶液——见14-24A(e)。本法可用目前市售试剂，勿须纯化。贮备液配制于重蒸CHCl₃中(100μg/L浓度较合适)并贮存于冰箱里。稀释液据需要配制。

(d)硫代硫酸钠溶液——1.5%。当天配制。

(e)次氯酸钠溶液——最好是有效Cl含量为5%的试剂。市售试剂有效Cl含量不等，配制时应加以注意。不用时贮存于冰箱中，且需每月测定其滴定度。(某些家用次氯酸盐制剂含有痕量的Hg，若使用这些制剂，需检查其空白值，含Hg大于0.1μg/ml的不能用。)

(f)稀乙酸——30%体积比浓度。

    (g)盐酸羟胺溶液——20%(w/v)。用稀双硫腙萃取至CHCl₃层保持绿色，用CHCl₃除去过量的双硫腙，过滤。

3.试验过程

3.1.注意事项

关键步骤是样品的消化。消化必须完全，否则残余的有机物可能会与Hg结合而阻止或妨碍双硫腙的萃取。消化液中的氧化性物质必须破坏掉，以免双硫腙试剂被氧化分解，使得Hg不能被定量萃取。另外，由于Hg化合物的挥发性，制备样品过程要小心加热消化。萃取前样品液的酸度(用NH₄OH部分中和后)应大致为1N而不应大于1.2N。活塞上不要使用硅氧烷润滑剂。

3.2.样品的制备

(酸消化于通风橱内进行)

测定用的湿样应相当予≤10g的干样。

(a)新鲜水果或蔬菜及饮料——称取适量样品于消化瓶内，加入6颗玻璃球，组装好仪器，从滴液漏斗加入20ml HNO₃让冷凝管中的冷凝水快速通过，索氏提取器的活塞置于回流状态，通过一开孔的石棉板(孔径2—5cm)，用小火给烧瓶加热(开始时不能让反应过于剧烈，否则产生的大量NO₂烟雾会通过冷凝管携带走消化液蒸汽，使Hg损失)，待初始的反应完成后，加热使消化液刚好呈回流状态。若混合物颜色变黑，据需要从漏斗滴加HNO₃继续回流0.5h或至消化液稠度不再改变，冷却。

缓慢加入20ml冷HNO₃-H₂SO₄混合物(1+1)，(样品干重≤5g，则只需加10ml。)小火加热，必要时可不断地滴加少许HNO"以消除消化液中的黑色物。继续加热至纤维性物质(果皮，纤维素等)明显被消化，关闭索氏提取器的活塞至冷凝收集H₂O和酸的位置，加热至溶液变深棕色(但非黑色)后再继续加HNO₃。(脂肪与腊在回流状态不能被热酸完全消化，因此不必尝试在此步就将消化完全。)待脂肪与腊以外的其它物质均已溶解后，冷却，小心地把水与酸排放到消化液主体中，冷却，从冷凝管及仪器中间部分加入两份25ml的H₂O。取下反应烧瓶，放入冷水中冷却或于瓶子周围放些冰，以使脂肪与腊毛固化。用小块玻璃毛过滤除去不溶性物质，然后用2份10ml H₂O依次淋洗反应瓶及过滤用的玻璃毛填塞。取下索氏提取器，用热水洗涤提取器和烧瓶，以除去不溶性物质。从冷凝管加入热H₂O，洗去挥发的脂肪和油。弃去上述全部洗涤液。

     将盛样品滤液的烧瓶与仪器其它部件连接好，加热，并收集H₂O及酸于收集阱内。必

要时加入少量HNO₃使消化完全。在消化后期，调节火焰大小，使得消化液刚好沸腾 (微沸)，而酸蒸汽又不至冒过冷凝管的下半部分。加入最后一份HNO₃后再继续加热15min，此时消化液应呈无色或浅黄色。冷却，将辨内液体小心排放到反应瓶内，从冷凝管加入两份50ml H₂O，加热使溶液回流，直至全部NO₂从仪器内排尽。加入5ml 40% w/v尿素溶液，回流15min(消化液至此应呈无色或浅黄色)。

     (b)干果，谷类食品、种子和谷物——加HNO₃以前，先用50ml H₂O稀释样品，然后按 (a)制备样品。

     (c)肉类，鱼类及生物材料——由于这些样品脂肪和蛋白质含量较高扩刚开始消化时要格外小心，以免消化液泡沫进入冷凝管内。加20ml HNO₃于样品中并旋转烧瓶，先不加热，让其于消化装置上放置0.5h。加入25ml H₂O，用小火来回移动地小心加热，直到初始的剧烈反应结束，起泡停止后，按 (a)操作。

3.3.汞的分离

    先取1ml按E制备的样品液，用碱标定，并据此计算出将样品液酸度降至1.0N所需的浓NH₄OH量，然后按量加入，边加边转动烧瓶，以免NH₄OH局部过浓(任何时候都不能让溶液呈氨性，否则会生成Hg的配合物)。

    将样品液转入500ml分液漏斗中，加入10ml 4mg/L双硫腙溶液，并剧烈振摇1min。(若CHCl₃层呈现双硫腙的特征绿色，表明双硫腙过量，汞含量为0—5μg。)待分层后，迅速将CHCl₃层转入另一盛有25ml 0.1N HCl及5ml NH₄OH·HCl溶液的分液漏斗内。(可能仍有少量氧化性物质存在，如长时间与双硫腙溶液接触，可能会破坏双硫腙而影响汞的萃取。)

    用2份5ml双硫腙溶液重复率取样品液，CHCl₃层也转入第二个分液漏斗内。若第一次萃取结果表明样品液中Hg大于5μg;则可参考H表中数据，加入较高浓度的双硫腙溶液，直至经1min的剧烈振摇后，CHCl₃层双硫腙己明显过量。将CHCl₃层转入含有0.1N HCl的第二分液漏斗内，同样地也用2份10ml双硫腙溶液重复萃取样品液，萃取物也并入第二分液漏斗内。

    剧烈振摇第二分液漏斗1min，CHCl₃层转入盛有50ml 0.1N HCl的第三分液漏斗中。(将第二分液漏斗内的双硫腙萃取物与稀酸一同振摇，以除去混入的有机物。生物材料或蛋白含量高的样品，其水相因含有被硝化后的有机化合物而呈浅黄色。少量这类物质还可能被携带入第三分液漏斗内，而在那里被Cl破坏。)再用1—2mlCHCl₃萃取第二分液漏斗内容物，有机相并入第三分液漏斗中。

    加2ml Na₂S₂O₃溶液于第三分液漏斗中，剧烈振摇1min，分层后尽可能将CHCl₃层放净并弃去。(若溶液中含Cu，将以双硫腙盐的形式被除去。)再用1—2ml CHCl₃溶液萃取，将有机相小心放出并弃去。加入3.5ml NaOCl溶液(或不同滴定度但相当于175mg有效Cl的溶液)，以分解Hg的硫代硫酸盐配合物和氧化过量的硫代硫酸钠。剧烈振摇1min。用吸管加入5ml NH₄OH·HCl试剂，仔细润湿分液漏斗的瓶塞与颈部，剧烈振摇1min，将分液漏斗口置于排气口前，以吹掉任何残余的气态Cl。塞絮分液漏斗，剧烈振摇1min。(必须使全部次氯酸盐都已还原，否则即便是痕量的残余都会将随后加入的双硫腙氧化成黄色的氧化型，而在比色计上被误作Hg测定。)再用2—3mlCHCl，萃取溶液，小心放出有机层并弃去。最后水相应呈无色。

3.4.测定

    加3ml 30%的HOAc于第三分液漏斗中，并参考H表中数据，加入适当体积和浓度的双硫腺溶液，按H用比色法测Hg。借助工作曲线，将490nm波长处的吸收A转化成μgHg。

3.5.标准曲线的制作

使用1cm比色皿时，下表对制作标准工作曲线与估计样品液中Hg的含量范围很有用：

根据所需范围制作工作曲线。取点可从空白起到此范围的最高限，中间包含4个浓度点。取一系列分液漏斗，各加入50ml 0.1N HCl，适量的汞，5ml NH₄OH·HCl及5ml CHCl₃。剧烈振摇1min，分层后将CHCl₃层放出并弃去。这里应尽可能仔细地将所有的有机液滴都排放干净。加入3ml 30%HOAC及适量双硫腙溶液，剧烈振摇1min，让其分层。(HOAc有助于双硫腙汞盐的稳定)把一小团棉花插入分液漏斗颈内，将双硫腙萃取物过滤并收集到试管中(弃去最前面放出的1ml)，转入适当的吸收池，于比色计上测定490nm波长的吸收九。(由于稀的双硫腙溶液与双硫腙汞盐都不太稳定，测定需马上进行。)以A对μgHg作图得标准曲线。

4.来源

AOAC官方方法952.14*