AM-AM-FS-Ac-12009 牛肉末中的防腐剂

AMAMFSAc12009  牛肉末  防腐剂  分光光度法

AM-AM-FS-Ac-12009

牛肉末中的防腐剂

1 适用范围

适用于牛肉末里的抗坏血酸盐、苯甲酸盐、山梨酸盐和亚硫酸盐。

2.试剂

(a)对品红酸性溶液——将100mg对品红氯化物和200ml水放入1L容量瓶内。加入160mlHCl(1+1)并稀至刻度。在使用前放置12h。

    (b)四氯合汞酸钠溶液——溶解4.7gNaCl和10.9gHgCl₂，于约1900ml水中，用水稀释至2L。

    (c)甲醛溶液——15mg/100ml。2ml福尔马林用水稀释到100ml。取出2m1进一步用水稀释至100ml。

    (d)亚硫酸钠溶液——1mg/ml。将100mgNa₂SO₃溶解于100ml四氯合汞酸钠溶液中。

    (e)抗坏血酸溶液——1mg/ml。将100mgUSP抗坏血酸溶于100ml水中。应在使用前配制。

    (f)乙酸一偏磷酸溶液——10g HPO₃片溶解于HOAc(1+1)中，用HOAc(1+1)稀释至100ml。

    (g)靛酚标准溶液——25μg/ml。将50mg2，6-二氯靛酚钠盐溶解于50ml含有42mgNaHCO₃的水中。剧烈振动，用水稀释至200ml。通过带槽纹的滤纸过滤，放在琥珀色具玻璃塞瓶内于冰箱中保存。

按下述方法标定：移取三份2.0ml的抗坏血酸溶液 (e)，分别放入盛有0.4ml混合酸溶液 (f)和23ml水的3个50ml锥形瓶中。用25ml靛酚标准溶液快速滴定到从桃红—紫红终点，稳定10s。(每次滴定约需要15ml靛酚溶液，读数应精确到0.1ml)。靛酚的浓度用抗坏血酸的毫克数/ml表示。每天对新配制的抗坏血酸溶液进行标定。

    (h)苯甲酸钠溶液 ——2mg/ml。将200mg苯甲酸钠溶解于100ml水中。

    (i)山梨酸钾溶液——1mg/ml。将100mg山梨酸钾溶解于100ml水中。

3.试验过程

3.1.亚硫酸盐标准曲线的制备

    用移液管取0，1，2，3，4，5和6ml Na₂SO₃溶液分别放入7个100ml容量瓶中。向每个瓶中加入50ml四氯合汞酸钠溶液并用水稀释至刻度。从每个容量瓶中取1.0ml溶液分别放到200mm试管。加入5.0ml品红溶液，混合，加入10mlCH₂O溶液，混匀，放置30min。在550nm处以0ml标准溶液为参比测定吸光度A。以A对mgNa₂SO₃/ml(分别为0.01—0.06mg/ml)作图。

3.2.苯甲酸和山梨酸标准曲线的制备

用移液管吸取1，2，3，4，5和6ml苯甲酸钠溶液分别放入6个100ml容量瓶中，用水稀释至刻度。从每个容量瓶中分别移取5ml溶液放入6个50ml具玻璃塞量筒中。加入0.4mlHCl(1+1)和石油醚到50ml刻线处。塞住，振荡1min。用5ml水制备空白。在记录式分光光度计上从300到200nm扫描提取液。在约225nm最大吸收处读出吸光度A，减去空白。然后以△A对mg苯甲酸钠/5ml(分别为0.1—0.6mg)作图。

    用相似的方法制备山梨酸钾的标准曲线。以在约250nm处最大吸收的△A对mg山梨酸钾/5ml(分别为0.05—0.3mg)作图。

3.3.样品溶液的配制

    称取20g牛肉末放入200ml烧杯，加入85ml水，用玻璃棒搅拌并混匀，放置10min，放置时间不要太长。将溶液通过放有松玻璃毛塞的漏斗倾到第二个烧杯里。立刻取下5ml溶液进行亚硫酸盐的测定。要保证提取液体积是100ml(加入的85ml水+由牛肉得到的液体)。

3.4.测定

    (a)亚硫酸盐——吸取5ml滤过的提取液，放入盛有5.0ml四氯合汞酸钠溶液的200mm试管中，混合。转移1ml稀溶液到第二个200mm试管中，加入5ml p-蔷薇苯胺(对品红)溶液，混合。加入10.0mlCH₂O溶液，混合，放置30min。如果出现紫红色，用玻璃纤维过滤器过滤，按标准曲线的制备方法测定吸光度A。1ml试液代表0.1g肉，所以每0.01mg相当于0.01%的Na₂SO₃。如果颜色太深，可用四氯合汞酸钠溶液进一步稀释原试管中的溶液。

     (b)苯甲酸盐——吸取5ml滤过的提取液放入50ml具玻璃塞的量筒中，按C中制备标准曲线的步骤操作。从300到200nm扫描溶液。如果有苯甲酸盐存在，在约225nm处有峰出现，用标准曲线进行定量。5ml试液代表1g肉，所以每0.1mg相当于0.01%苯甲酸钠。

     (c)山梨酸盐——按苯甲酸盐的测定方法(b)进行操作。如果有山梨酸盐存在，在约250nm处有峰出现，用标准曲线进行定量。每0.5mg相当于0.005%山梨酸钾。

     (d)抗坏血酸盐——吸取25ml滤好的提取液放入125ml锥形瓶里。加入0.4mlHOAc-HPO₃溶液，混合。加入2.0ml靛酚溶液。如果溶液转移变成紫红色，并保持10s，就表示没有抗坏血酸存在。(不要等10s以上，因为染料本身会退色)。

     如果染料退色(溶液为灰色)，用滴定管以0.5ml增量滴加靛酚溶液到紫红色终点并稳定10s(不要等10s以上，因为颜色在放置时退去)。试验中加入的染料的最大体积为2.0ml。

       mg抗坏血酸/100g=(V×E)(100ml/25ml)×(l00/W)

式中，V=靛酚溶液的毫升数，E=mg抗坏血酸/ml靛酚标准溶液，W=样品重量(20g)。

4.来源

AOAC  官方方法 994.11 （第17版）