AM-AM-FS-Ac-15008（2） 蛋中的胆固醇

AMAMFSAc15008(2)  蛋  胆固醇  胆固醇的测定  滴定法

AM-AM-FS-Ac-15008

蛋中的胆固醇

1.仪器和试剂

1.1 仪器

     (a)冰浴——用碎冰填满15cm深的容量约为4L的容器。

     (b)Mohr移液管——一个刻度为0.01ml，一个刻度为0.1ml。

     (c)过滤瓶——能容纳大约300ml的锥形瓶，由两通道活塞与真空泵相连。

     (d)0℃过滤装置——Knorr萃取管型过滤管。内径约20mm管身约11cm长，管茎外径6—8mm，约10cm长，在较大管底部紧密装配了可移动的Ni、蒙乃尔合金或瓷的盘子(亦可用大孔隙，10cm管茎的Allihn多孔玻璃过滤器。)。

    从60℃，11cm直径的Bunsen漏斗顶端取下管茎，在顶部磨去玻璃使开口扩大约1cm直径。把大小合适的装在漏斗开口处的单孔橡皮塞的一头切下约1cm。把过滤管茎穿过漏斗顶端的塞子，然后把塞子插进钟型罐。

    在滤管中做好厚约6—8mm的石棉垫 (d)，用约12mm的砂层 (e)覆盖。

1.2 试剂

    (a)冰——大约12L压碎的冰可进行4次测定。

    (b)溴溶液——将装有5ml CCl₄的25ml细口玻璃塞瓶称重到0.1g。用1.0ml移液管加入0.6mlBr₂再称重。用CCl₄稀释到算得的最终浓度0.22+0.2gBr/ml，配好后应在48h内使用。

    (c)乙酸溶液——移取200mlHOAC放入250ml玻璃塞容量瓶，用H₂O稀至刻度，小心混匀，再稀释到刻度，混匀。

    (d)石棉。

    (e)砂——将过60号筛的净砂，用热HCl处埋直到提取液无色。洗净，干燥并灼烧。

    (f)次氯酸钠溶液——用200mlH₂O将88gNaOH溶于广口3L瓶中，加大约1.5L碎冰，通Cl₂直到吸收71gCl₂稀释到2L，用棕色瓶保存于冰箱 (溶液对酚酞应呈碱性)，用前检查有效Cl的浓度如下:移取5ml溶液放入盛有100mlH₂O中含2gKI的瓶中，加5ml 6N HCl，用0.1N Na₂S₂O₃滴定，溶液有效Cl应与0.95—1.05N的NaOCl的相当。按上述方法检验试剂或市售5%NaOCl的浓度是满意的。

    (g)甲酸钠溶液——配制含0.5g HCOONa/ml的水溶液。

    (h)盐酸——约6N。将520mlHCl用水混匀稀释到1L。

    (i)甲基红指示剂——0.5g甲基红溶于50ml乙醇，用H₂O稀释到100ml，过滤。因为溶液必须不含不溶性物质，因此如果必要，在使用前当时重新过滤。

    (j)碘化钾溶液——20%(用HCl酸化时，溶液必须无色)

    (k)淀粉溶液——1%可溶性淀粉溶液。

    (1)硫代硫酸钠溶液——0.02N。当天用0.1N溶液稀释配制。

    (m)氢氧化钾溶液——10gKOH溶于10mlH₂O。

    (n)铝酸镀溶液——5g(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O溶于100mlH₂O。

2.试验过程

    把Br和25ml量筒放入冰中，在过滤管周围放上冰，小心操作，不要把冰放进滤器。在冰-NaCl混合液中，使HOAC溶液冷却到大约－5℃。

    从Mohr管中放出2.0ml无水乙醚，边摇边冲洗带有不皂化物的50ml锥形瓶侧壁;用软木塞塞好，振荡到瓷片不再粘附在瓶上。把瓶放入冰浴到颈不少于10min。从Mohr管中向一个瓶中加0.2ml冷Br溶液，振荡混合，塞好，再放入冰浴。对其它瓶子每隔3min开始此操作 (如果钟型罐合用，一次可以进行4个测定)。

    10min后，从冷的25ml量筒中迅速加入15mlHOAc溶液，冰-H₂O中振荡3min，再放入冰浴10min。边抽气边用搅棒把全部溶液倒入过滤管，把搅棒留在滤器中，用5ml冷的HOAc冲洗瓶壁，再放入冰浴。当滤器里的液体刚好降到低于沙子表面时，从瓶中加HOAc。同样再用5ml HOAc溶液洗，并抽出滤器中的过量液体。用冷水灌满滤管大约3次以洗涤滤器和瓶子，彻底排干滤器，并抽气到完全没有水滴从管茎滴落，撤去滤管周围的冰，弃去滤液和洗涤液。

    将300ml锥形瓶放在滤器下方，使管茎正好插入瓶颈。用10ml乙醇，10，5和5ml醚冲洗滤管和滤器，最后用10ml乙醇洗。将沙和各份溶液轻轻搅动，在抽气前使混合物放置约1min。用几毫升乙醚洗涤滤器管茎，加1ml KOH溶液，混合，用5ml醚清洗瓶壁。在蒸气浴上完全蒸发醚和乙醇，最后用清洁空气气流除去最后的乙醇蒸气。

    向残留的碱性液中加40ml热H₂O，混匀，加1滴甲基红，用6N HCl中和碱(只需近似中和)。加10gNaCl，3gNaH₂PO₄·H₂O和20ml NaOCl溶液。加热使溶液刚好剧烈沸腾，从热源上撤下，立即小心地加入5ml HCOONa溶液。冷却，用H₂O稀释到约150ml。加5ml KI溶液，1或2滴铝酸铵溶液和25ml 6N HCl。立即用Na₂S₂O₃溶液迅速滴定，用淀粉溶液做指示剂，以把KOH溶液加到乙醚-醚溶液为起点，测定试剂空白，校正滴定。

mg胆固醇=0.55+0.688×0.02N Na₂S₂O₃的ml。

3.来源

AOAC 官方方法 941.09（17版）