AM-AM-FS-Ac-04002 生咖啡中的咖啡碱

AMAMFSAc04002  生咖啡  咖啡碱  微量法

AM-AM-FS-Ac-04002

生咖啡中的咖啡碱

1.试验过程

将试样磨细至能通过40号筛。在研磨过程中，使用咖啡磨碎机或大型高速搅拌器，并用干冰 (固体CO₂)冷却试样以免成糊状。

称取5g制备好的试样，磨碎试样，通过30号筛。置于已称重的1L锥形瓶中，加入约500ml H₂O，摇动，加热至沸。加入l0g重质MgO，小火加热保持微沸2h并不时摇动。加水防止起泡并冲洗瓶壁。冷却，以补加水的办法使体系总重量:瓶重+5l0g+试样重。过滤，收集200ml澄清滤液(相当于试样重的40%)，加入20ml H₂S0₄(1+9)，移入500ml分液漏斗中，分别用25,20,15,10,10和10ml CHCl₃萃取6次。将萃取液合并，加入5ml 1%KOH溶液处理。分层后，将CHCl₃层放入克氏烧瓶中，用CHCl₃洗涤分液漏斗中的碱性溶液两次，每次10ml。将洗涤液合并于烧瓶中，蒸发或蒸馏除去CHCl₃直至体积小于25ml。

    冷却，加入约200ml水，低于25℃时加入25ml硫化物或硫代硫酸盐溶液，混合以沉淀Hg。加几粒Zn粒，以防暴沸。将瓶斜置，加入一层NaOH，不要搅拌(每用10ml H₂S0₄或与之相当的稀H₂SO₄应加15g固体NaOH或溶液，以使其呈强碱性。)(硫代硫酸盐或硫化物溶液可在加入消解瓶之前与NaOH混合好)。立即与冷凝器接好，冷凝器的出口管插入到标准酸溶液中，加入5-7滴指示剂，转动消解瓶使其充分混合，然后加热，直至全部NH₃蒸出 (蒸馏液≥150ml)。移开接收瓶。冲洗冷凝器出口管，用NaOH标准溶液滴定蒸馏液中过量的标准酸量。与此同时，应测定试剂空白，予以校正。

    N%=[(标准酸 (ml)×酸的当量浓度)－(标准NaOH(ml)×碱的当量浓度)]

          ×l.4007/g样品

                     蛋白含量=总N%一N%(咖啡碱)×6.25

1ml 0.05M H₂SO₄=4.85mg无水咖啡碱。

2.来源

AOAC官方方法965.25（17版）