AM-AM-FS-Ac-16017 油煎腊肉中的挥发性N-亚硝胺

AMAMFSAc16017  油煎腊肉  挥发性N-亚硝胺  矿物油真空蒸馏-热能分析仪法

AM-AM-FS-Ac-16017

油煎腊肉中的挥发性N-亚硝胺

1.仪器和试剂

1.1 仪器

    一切玻璃器皿在使用前均应充分洗净并用CH₂Cl₂冲洗。

    (a)沸煮瓶——500ml具有温度计井和24/40$瓶颈。

    (b)温度计——75mm浸入式，－20至150℃，分度1℃。

    (c)蒸汽捕集器——具有"O"型密封圈套管接头。规格为18/9。

    (d)连接器——具有$24/40内接接口，底部有18/9"O"型密封圈了磨口接口。

    (e)真空泵——每min取代25L大气。

    (f)真空管道——5/16in孔径。

    (g)真空控制器。

    (h)气压计——有防护套。

    (i)加热套——500ml。

    (j) 加热带——双电池 (电极)。

    (k)瓶——350mm深×110mm内径。

    (l)实验室千斤顶。

    (m)自动变压器——调压变压器。

    (n)漏斗——布氏漏斗，60ml，粗孔径多孔滤板。

    (o)蒸发浓缩器——250ml。

    (p)浓缩管——规格425，4ml，有塞。

    (q)蒸馏柱——三节，规格121。

    (r)浓缩装置——包裹聚四氟乙烯的针管和温度计。

    (s)气相色谱仪——自动冷却，温度程序控制，进样口温度程序控制，自动开门。从气相色谱仪到TEA的玻璃衬里加热传输线，双柱系统带示差流量控制器，气压计和转子流量计;记录仪R11M，单笔，1mv满刻度，或等效品。

    玻璃柱2.5m×3.0mm内径 (5.0mm外径)。填充涂以10%聚乙二醇20M和5% KOH的100-120目Analab AB。填充前，取聚乙二醇20M 5.0g及KOH2.5g，溶于100ml甲醇中，溶液置500ml圆底烧瓶中，瓶颈24/40。缓缓加入42.5g Anakrom AB100-120目，同时轻轻摇晃烧瓶。将烧瓶置于旋转蒸发器上约5min，开始时缓缓减压，待停止发泡后减压至6.5mmHg。

     旋转到使载体表面光洁能翻动时，表示甲醇己全部逸出。缓缓解除真空并取出烧杯，

将烧瓶连同载体置于100℃自然对流烘箱中以除去痕量的甲醇。将涂上的载体移至有螺旋盖的瓶中保存。填充时在轻度减力下一点一点加入柱中，并用棒轻击使不沾壁。填满后在两端塞一小团玻璃棉。将填好的柱脱开热传输管线，在225℃用氮气40ml/min老化24h。操作条件:进样口185℃，柱165℃等温，从色谱仪到TEA的连接管路230℃，N载气40ml/min。

    操作参数:1.5ngN-亚硝基吡咯烷的记录仪响应为10%以上。N-亚硝基哌啶与N-亚硝基吡咯烷的分辨率不低于0.8，计算式如下:

    R=(T₂－T₁)/1/2(W₁+W₂)

式中T₁和T₂=N-亚硝基哌啶与N-亚硝基吡咯烷的保留时间(min);W₁和W₂=N-亚硝基哌啶与N-亚硝基吡咯烷的基线上的峰宽。

    (t)热能分析仪(TEA)——502型。按仪器说明书操作，但用液氮作为捕集器冷却剂。

1.2 试剂

    (a)液体石蜡——重，粘度335/350，实验室级。

    (b)二氯甲烷——在全玻璃器中蒸馏，每批取100ml浓缩至1.0ml，检查有无干扰峰。

    (c)硫酸钠——无水。

    (d)碳化硅——12号粒度。

    (e)N-亚硝胺混合标准——贮备液每1ml异辛烷中含下列物质各5μg:N-亚硝基二甲胺(NDMA)，N-亚硝基二乙胺(NDEA)，N-亚硝基二丙胺(NDPA)，N-亚硝基二丁胺 (NDBA)，N-亚硝基哌啶 (NPIP)，N-亚硝基吡咯烷 (NPYR)，N-亚硝基吗啉)。

    (f)混合工作标准液——亚硝胺各0.25μg/ml，用CH₂Cl₂稀释贮备液1?20。

    (g)N-亚硝基二丙胺(NDPA)，内标溶液——贮备液15μg/ml异辛烷。工作标准液:0.5μg/ml用CH₂Cl₂稀释贮备液1:10，作为内标溶液。

2.试验过程

(注意:使用亚硝胺或亚硝胺溶液时必须十分谨慎，因为这些化合物是强致癌物。)

2.1.样品的制备

    油煎腊肉在－18℃冰箱中或在干冰中放置过夜。冻肉绞碎并通过3/8in网眼板，混匀。样品放入绞肉机再绞一次，混匀。置－18℃冰箱中保存。

2.2.蒸馏

    仪器装置见图1。

    称取样品25.0g置500ml有温度计井的圆底烧瓶中，加0.2N NaOH 2.0ml，NOPA内标溶液0.500ml及液体石蜡25.0ml，将烧瓶置于加热罩中，用接管连接沸煮瓶与捕集器，捕集器预先用2ml水湿润并在液氮中达到平衡。连接压减装置，检查在操作压力低于2torr时是否漏气。保持此压力l0min，然后加热。用加热带包裹接管，加热使沸煮瓶内温度按充满油的井内温度指示，在55—60min内由室温上升至120℃接管内温度为170—175℃。加热结束时移去加热罩使烧瓶冷却而接管继续加热15min保持170—175℃及真空状态。

    小心解除真空，并将瓶与捕集器分开，卸下烧瓶，倒转接管，捕集器连同接管置于通风柜中至内容物成为液体。

2.3.转移，提取和干燥

用CH₂Cl₂ 10.0ml冲洗接管，洗液收集于捕集器中，除去接管，馏液与CH₂Cl₂洗液移至125ml分液斗漏中，用15mlCH₂Cl₂洗涤捕集器，5ml洗茎部，10ml洗器身，洗涤时振摇1min，转移CH₂Cl₂洗液至分液漏斗中并振摇提取1min，静置使液相分层。

    将下层CH₂Cl₂液移至另一分液漏斗中，再洗涤捕集器提取二次。合并的CH₂Cl₂液通过30g无水硫酸钠(装在60ml粗孔径重熔玻璃漏斗中，预先用25ml CH₂Cl₂湿润，进入连接4ml浓缩管的250ml K-D烧瓶中，用25ml CH₂Cl₂洗涤第二个分液漏斗，洗液并入K—D烧瓶。

2.4.浓缩

    取碳化硅一粒置浓缩管中，将3球Snyder柱接到K—D烧瓶上，在60℃ H₂O浴上用约1.5h小心浓缩溶液至4ml。移去浓缩器，拭干，在空气中冷却至室温，Snyder柱中残余的溶液滴入溶缩管中。

    将浓缩管移至N-蒸发系统中，在氮气流下用约30min使液体缩减至1.0ml。

2.4.测定

取含0.25μgN-亚硝胺/ml的混合工作标准液6.0μl注入偶连TEA的气相色谱仪，得到每个亚硝胺类化合物的保留时间和响应 (μg/mm)，见图2。

注射6.0μg浓缩的样品提取液，得到每个化合物的保留时间和响应 (注:必须用单个标准溶液确定相对的保留图谱)。如NDPA内标的回收率不小于70%或超过110%，应重复样品的分析。

    按下式计算每种亚硝胺在提取液中的量，并测出其在原样品中的含量:

    ng亚硝胺/g样品=(PH/PH')×10

式中PH和PH'分别为样品和标准溶液的峰高。

图1  泵和蒸馏装置(成对的，也可用单个的蒸馏装置)a.千斤顶;

                 b.气压计;c真空控制%；d.真空泵；e.三通活塞；f.橡皮管夹;g.蒸

                 气捕集%;h.液氮;i.杜瓦瓶;j.加热带；k.温度计(-20℃至l50℃);

               1.5ml沸煮瓶，有温度计井;m.电力调节器。

图2  亚硝胺混合标准溶液的液相色谱图:1.50ngN-亚硝基二甲胺NDMA;

1.58ngN-亚硝基二乙胺NDEA;1.46ngN-亚硝基二丙胺NDPA;l.5gngN-亚硝基

二丁胺NDBA;l.ngN-亚硝基哌啶NPIPil.67ngN-亚硝基吡咯烷NPYR;

1.80ngN-亚硝基吗琳NMOR。

3.来源

AOAC 官方方法 982.22（17版）